检测原理

本试剂盒采用竞争性ELISA法检测大鼠样本中的维生素A（视黄醇）。样本中的VA与预包被在微孔板上的VA抗原竞争结合辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗体。清洗后，加入底物显色，样本中VA浓度与吸光度（OD值）呈负相关。通过标准曲线计算样本中VA含量。

试剂盒组成

| 组件 | 规格 | 保存条件 |

| 预包被VA抗原微孔板 | 96孔（12条×8孔）| 2-8°C |

| 维生素A标准品 | 6管（0, 0.1, 0.3, 0.6, 1.2, 2.4 μg/mL）| -20°C |

| HRP标记抗VA抗体 | 1瓶（12mL） | 2-8°C（避光） |

| 样本稀释液 | 1瓶（20mL） | 2-8°C |

| 洗涤缓冲液（20×浓缩液）| 1瓶（50mL） | 2-8°C |

| TMB显色底物 | 1瓶（10mL） | 2-8°C（避光）|

| 终止液（2M H₂SO₄） | 1瓶（10mL） | 2-8°C |

| 封板膜 | 3张 | 室温 |

样本前处理

血清/血浆： 采集后30分钟内4°C离心（2000×g, 15分钟），分装上清于-80°C保存，避免反复冻融。

组织（肝脏等）： 称重后加入9倍体积PBS匀浆，离心取上清检测（需用稀释液适当稀释）。

操作步骤

试剂准备：

洗涤液：20×浓缩液用去离子水1:20稀释。

标准品/样本稀释：

标准品梯度稀释（0-2.4 μg/mL）。

血清建议用样本稀释液1:5预稀释。

加样与孵育：

每孔加标准品/样本50μL + HRP标记抗体50μL，37°C避光孵育60分钟。

洗板： 用洗涤液洗板5次，拍干。

显色： 每孔加TMB底物90μL，37°C避光显色15分钟。

终止： 每孔加终止液50μL。

检测： 450nm波长读取OD值（630nm作参比）。

结果计算

计算标准品和样本的平均OD值。

以标准品浓度为横坐标（log），B/B0%（OD值/0标准OD值×100%）为纵坐标，拟合标准曲线（四参数拟合）。

根据样本OD值从曲线中计算浓度，乘以稀释倍数。

技术参数

灵敏度： 0.05 μg/mL

检测范围： 0.1 - 2.4 μg/mL

精密度：

批内变异系数（CV）< 8%

批间变异系数（CV）< 12%

回收率： 85%-110%

特异性： 不与β-胡萝卜素、视黄酸交叉反应

注意事项

所有试剂平衡至室温后使用，避免反复冻融标准品。

严格控制孵育时间和温度，显色时间可根据实际颜色调整。

终止后30分钟内完成OD值读取。

样本中高脂可能导致假阳性，建议高速离心（12000×g）去除脂质。

重要： 不可使用溶血或脂血样本。

安全提示

终止液（浓酸）具有腐蚀性，避免皮肤接触；废液需中和处理。

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