大鼠巨噬细胞炎症蛋白5(MIP-5)ELISA试剂盒

产品概述

本试剂盒用于定量检测大鼠血清、血浆或其他生物液体中的巨噬细胞炎症蛋白5（MIP-5/CCL15），采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），具有高灵敏度和特异性，适用于科研用途，不可用于临床诊断。

检测原理

基于双抗体夹心法：

预包被抗大鼠MIP-5抗体的微孔板捕获样本中的MIP-5。

加入HRP标记的检测抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。

洗涤后加入TMB底物显色，在过氧化物酶催化下生成蓝色产物，酸化后转为黄色。

通过酶标仪测定450 nm波长下的吸光度（OD值），样本浓度与OD值呈正相关。

试剂盒组成

预包被微孔板（96T或48T）

MIP-5标准品（浓度梯度）

HRP标记检测抗体

TMB显色液、终止液

洗涤缓冲液（20×浓缩液）

封板膜、说明书

样本处理

血清/血浆采集：

血清：全血静置30分钟后离心（3000 rpm，10分钟），避免溶血。

血浆：使用EDTA/肝素抗凝管采集，离心（3000 rpm，30分钟）分离上清。

保存：短期（24小时）可置于2~8℃，长期需-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。

操作步骤

标准品稀释：按说明书梯度稀释。

加样：分别加入标准品、样本至微孔（100 μL/孔），37℃孵育90分钟。

洗涤：弃液后加洗涤液（300 μL/孔），重复5次。

加检测抗体：每孔加入HRP标记抗体（100 μL），37℃孵育60分钟。

显色：加入TMB底物（90 μL/孔），避光反应15~30分钟。

终止：加入终止液（50 μL/孔），立即测定OD450 nm。

结果计算

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过曲线方程计算样本浓度。

注意事项

试剂使用前需平衡至室温（20~25℃）。

避免交叉污染，不同样本使用独立吸头。

显色时间需严格控制，终止后30分钟内完成检测。

技术参数

检测范围：通常为15.6~1000 pg/mL（具体以标准曲线为准）。

灵敏度：<5 pg/mL。

批内/批间差：CV<10%。

保存条件：2~8℃避光保存，有效期6个月。

适用样本

血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆等。
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