预期用途

本试剂盒用于定量检测大鼠血清、血浆、细胞培养上清液、组织裂解液（特别是脑组织）或其他生物液体中的天然大鼠水通道蛋白4 (AQP-4) 浓度。适用于科学研究用途，不用于临床诊断。

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法 (Sandwich ELISA)。

将特异性识别大鼠AQP-4的捕获抗体预包被在微孔板上。

加入标准品、待测样本或质控品，其中的AQP-4蛋白会与包被抗体结合。

洗板去除未结合物质。

加入生物素标记的检测抗体，该抗体与AQP-4蛋白的另一表位结合，形成“捕获抗体-AQP-4-检测抗体”复合物。

洗板去除未结合的检测抗体。

加入辣根过氧化物酶 (HRP) 标记的链霉亲和素 (Streptavidin-HRP)，其与生物素特异性结合。

洗板去除未结合的Streptavidin-HRP。

加入显色底物溶液 (TMB)，在HRP催化下产生蓝色产物，其颜色深浅与样本中AQP-4的浓度成正比。

加入终止液 (Stop Solution) 终止反应，溶液由蓝色变为黄色。

在酶标仪上于450 nm波长（建议使用570 nm或630 nm作为参考波长进行双波长校正）测量吸光度值 (OD值)。

根据标准曲线计算样本中AQP-4的浓度。

样本要求

类型： 血清、血浆 (EDTA/肝素抗凝)、细胞培养上清液、组织裂解液 (推荐脑组织)。

处理：

血清/血浆： 采集后尽快离心分离 (通常2000-3000 rpm, 10-20 min)，分装，-20°C或-80°C保存。避免反复冻融。检测前恢复至室温，轻柔混匀。如有明显沉淀，离心后取上清。

细胞培养上清： 离心去除细胞碎片，分装，-20°C或-80°C保存。避免反复冻融。

组织裂解液： 取适量组织（如脑组织），用冰冷的PBS冲洗，吸干。称重，加入适量裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂），冰上或4°C匀浆。离心（通常12000 rpm, 5-10 min, 4°C），取澄清上清液分装，-20°C或-80°C保存。检测前需恢复至室温，轻柔混匀。建议测定总蛋白浓度，以便结果标准化 (如 ng AQP-4 / mg 总蛋白)。

稀释： 部分样本（如组织裂解液、高浓度样本）可能需要用样本稀释液进行预稀释。**稀释倍数需通过预实验确定。未稀释样本应尽快检测。

性能参数

检测范围： 1.56 - 100 ng/mL。

灵敏度： 最低检测浓度 (Limit of Detection, LoD) 通常 ≤ 1.0 ng/mL (指能与零标准品区分开的最低浓度)。

精密度：

批内变异系数 (Intra-assay CV)： < 10%

批间变异系数 (Inter-assay CV)： < 15%

回收率： 通常为 85% - 115% (在适当基质中添加已知量标准品测得)。

特异性： 可检测天然和重组大鼠AQP-4。与其它大鼠水通道蛋白 (如AQP-1, AQP-2, AQP-5等) 无明显交叉反应。与其他物种AQP-4交叉反应性低或无。

线性： 样本在适当稀释后，其测定值在标准曲线范围内应呈线性。

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