产品用途

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定(Sandwich ELISA)原理，用于定量检测大鼠血清、血浆、细胞培养上清液或其他生物液体样本中的**免疫球蛋白M (IgM)**浓度。

检测原理

预包被： 酶标板上预包被有大鼠IgM特异性的抗大鼠IgM单克隆抗体作为捕获抗体。

样本/标准品加入： 将稀释好的待测样本或系列浓度的IgM标准品加入酶标板孔中。样本中的大鼠IgM会被固定在板上的捕获抗体特异性地结合。

洗涤： 洗去未结合的物质。

生物素化抗体加入： 加入生物素标记的抗大鼠IgM抗体（检测抗体），该抗体与已捕获的大鼠IgM的不同抗原表位结合，形成“Capture Antibody-大鼠IgM-Biotinylated Detection Antibody”复合物。

洗涤： 再次洗去未结合的生物素化抗体。

酶结合物加入： 加入链霉亲和素-辣根过氧化物酶(Streptavidin-HRP)复合物。链霉亲和素与生物素具有高亲和力，从而将HRP连接到复合物上。

洗涤： 最后一次彻底洗涤，除去未结合的链霉亲和素-HRP。

底物显色： 加入**3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)**底物溶液。HRP在过氧化氢存在下催化TMB反应，生成蓝色产物。

终止反应： 加入硫酸或盐酸等终止液终止反应，颜色由蓝色变为黄色。

吸光度测定： 使用酶标仪在450nm波长下立即测定各孔的吸光度值(OD值)。颜色深浅与样本中大鼠IgM浓度呈正比。通过标准曲线可计算出样本中IgM的精确浓度。

主要试剂盒组分

（以96孔板为例）

| 组分 | 数量 (96T) | 储存条件 |

| 预包被抗大鼠IgM抗体的微孔板 | 8孔×12条(可拆卸) | 2-8°C |

| 大鼠IgM标准品 (Lyophilized) | 2支 | -20°C* |

| 标准品/样本稀释液 | 1瓶 (30mL) | 2-8°C |

| 生物素化抗大鼠IgM抗体 (10x) | 1支 (120μL) | 2-8°C* |

| 抗体稀释液 | 1瓶 (10mL) | 2-8°C |

| 链霉亲和素-HRP (100x) | 1支 (120μL) | 2-8°C* (避光) |

| HRP稀释液 | 1瓶 (10mL) | 2-8°C |

| TMB底物溶液 | 1瓶 (10mL) | 2-8°C (避光) |

| 终止液 (1M H₂SO₄ 或 2M HCl) | 1瓶 (10mL) | 室温 |

| 浓缩洗涤液 (25x) | 1瓶 (30mL) | 室温 |

| 封板膜 | 4张 | 室温 |

| 说明书 | 1份 | |

样本收集与处理

血清： 用EDTA或肝素抗凝或不抗凝管收集全血，室温放置1-2小时或2-8°C过夜凝固，4°C，1000×g离心15-20分钟，小心吸取上层血清。避免溶血。

血浆： 用EDTA或肝素等抗凝剂抗凝后，4°C，1000×g离心15-20分钟，小心吸取上层血浆。注意抗凝剂可能影响检测，应优先使用血清。

细胞培养上清液： 离心去除细胞碎片和颗粒，取上清。

保存： 新采集的样本建议立即检测。如不能立即检测，可分装后于**-20°C或-80°C**保存。避免反复冻融。测定前，样本应恢复到室温并轻轻混匀。浑浊或高脂样本需离心澄清后再检测。

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