大鼠第八因子相关抗原(FⅧAg)ELISA试剂盒

检测原理

采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。预先包被抗FⅧAg抗体的微孔板中依次加入样本、标准品及HRP标记检测抗体，经温育洗涤后，TMB底物显色（蓝色→黄色），颜色深度与样本中FⅧAg浓度呈正相关。450nm波长下测定OD值，通过标准曲线计算浓度。

试剂盒组成

酶标包被板：48孔/96孔（2-8℃保存）

标准品：浓度2700ng/L，0.5ml/瓶

酶标试剂：3ml（48孔）/6ml（96孔）

标准品稀释液：1.5ml

封板膜、密封袋

说明书

样本要求

类型：血清、血浆、组织匀浆液

处理：

血清/血浆：无菌采血后3000rpm离心10分钟，避免溶血或反复冻融。

短期保存：2-8℃≤48小时；长期保存：-20℃（1个月）、-70℃（6个月）。

操作步骤

试剂平衡：所有组分室温平衡30分钟。

加样：标准品及样本按梯度加入预包被板，每孔建议加样量100μl。

孵育：37℃温育60分钟，洗板5次。

酶标抗体：加入HRP标记抗体，37℃孵育30分钟，洗板5次。

显色：每孔加TMB底物，避光反应15分钟，终止液终止。

检测：450nm读值，绘制标准曲线（横坐标：标准品浓度；纵坐标：OD值），计算样本浓度。

注意事项

避免反复冻融标准品或样本。

加样时间控制在10分钟内以保证重复性，建议使用多道移液器。

不同批次试剂不可混用。

实验废弃物需按生物危害处理。

性能参数

灵敏度：≤1.0ng/ml（具体以实际批次为准）

检测范围：5-2000ng/ml

精密度：板内变异系数<10%，板间<15%
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