检测原理

双抗体夹心法 (Sandwich ELISA)。利用特异性抗体捕获大鼠IgG，再用酶标抗体检测。

检测范围 通常为 1.563 - 100 ng/ml

灵敏度 最低检测限通常在 0.938 - 5.5 ng/ml 之间。

样本类型 血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、细胞培养上清、组织匀浆等。

种属特异性 仅针对大鼠 (Rat) IgG，包括IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3亚型。

检测原理与操作流程

该试剂盒利用抗原抗体的特异性反应来定量分析样本中的IgG浓度：

预包被：酶标板上已预包被捕获抗体。

结合：加入样本（或标准品）后，其中的大鼠IgG与板上的抗体结合。

酶标：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，形成“夹心”复合物。

显色：加入TMB显色底物，酶催化底物变蓝；加入终止液后变为黄色。

读数：在酶标仪 450nm 波长处测定吸光度（OD值）。样本的OD值与IgG浓度成正比，通过标准曲线即可计算出具体浓度。

样本处理与操作关键点

为了保证实验数据的准确性，以下几点在操作中至关重要：

样本制备：

血清：全血室温放置30分钟-2小时凝固，离心取上清。

血浆：需在采集后30分钟内离心，使用EDTA或肝素抗凝。

注意事项：样本若不立即检测，应分装保存于-20℃或-80℃，避免反复冻融。严重溶血或浑浊的样本可能会影响结果。

试剂平衡：

洗涤液（通常为20X浓缩液）在低温下可能会析出结晶，使用前需在室温水浴中溶解。

所有试剂在加样前，建议在室温（25-28℃）平衡一定时间，温度过低会导致OD值偏低。

洗板：

洗涤是ELISA实验成败的关键。洗涤不充分会导致背景过高，非特异性吸附增加；洗涤过度则可能导致抗原抗体脱落。通常建议洗涤3-5次。

标准曲线：

每次实验都建议做标准曲线，不要使用存储在仪器中的旧曲线，以保证定量的准确性。

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