预期用途

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法，用于定量检测大鼠血清、血浆、细胞培养上清液或其他生物样本中的免疫球蛋白E（IgE）含量。适用于免疫学研究、过敏性疾病模型、药物效果评价等科研领域。

注意： 不可用于临床诊断。

检测原理

预包被板： 96孔板预包被抗大鼠IgE单克隆抗体。

样本添加： 样本中的大鼠IgE与抗体结合。

检测抗体： 加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗体，形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。

显色反应： 加入显色底物TMB，在HRP催化下产生蓝色产物。

终止检测： 加入终止液（酸性溶液）变黄色，在450nm波长下测定吸光度（OD值）。

主要试剂组分

| 组分 | 规格 | 保存条件 |

| 预包被微孔板 | 96孔（12条×8孔） | 2-8°C |

| 大鼠IgE标准品 | 0.5mL × 1支（浓度：0-800 ng/mL） | -20°C |

| HRP标记抗体 | 0.12mL × 1支 | -20°C |

| 样本稀释液 | 15mL × 1瓶 | 2-8°C |

| TMB显色液 | 10mL × 1瓶 | 避光，2-8°C |

| 终止液 | 10mL × 1瓶 | 2-8°C |

| 洗板液（20X） | 30mL × 1瓶 | 2-8°C（稀释后2-8°C保存1周） |

| 封板膜 | 3张 | 室温 |

样本要求

类型： 血清、血浆（肝素/EDTA抗凝）、细胞上清液。

采集与保存：

避免溶血或反复冻融。

2-8°C保存≤48小时；长期保存需分装后 -20°C/-80°C冻存（6个月内稳定）。

稀释比例： 推荐用样本稀释液按 1:10~1:100 预稀释（具体依样本中IgE浓度调整）。

所需设备（用户自备）

酶标仪（450nm滤光片）

37°C恒温孵育箱

微量移液器及吸头

洗板机或手动洗板器

蒸馏水/去离子水

离心机（样本处理）

操作步骤

准备试剂： 将所有组分平衡至室温（约30分钟），配制洗液（1X）。

标准品稀释： 将标准品梯度稀释为0、50、100、200、400、800 ng/mL。

加样： 每孔加入100μL标准品/样本，37°C孵育1小时。

洗涤： 弃液→加洗液→静置30秒→弃液，重复5次。

加酶标抗体： 每孔100μL，37°C孵育30分钟。

洗涤： 同上（步骤4）。

显色： 每孔加90μL TMB，避光37°C孵育15分钟。

终止： 每孔加50μL终止液，颜色转黄。

检测： 立即在450nm波长下读取OD值（建议加读570nm校正孔）。

注意事项

仅限科研使用，不可用于诊断或治疗！

不同批次试剂不可混用。

TMB具刺激性，请穿戴手套操作。

终止后30分钟内完成读数以保准确性。

异常样本建议复测或梯度稀释。

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