产品概述

本试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA），用于体外定量检测大鼠血清、血浆、组织匀浆或细胞上清液中磷酸肌醇3激酶（PI3K）的含量。

实验原理

包被：微孔板预包被抗大鼠PI3K捕获抗体。

反应：依次加入待测样本、标准品及HRP标记的检测抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。

显色：经洗涤后加入TMB底物，在过氧化物酶催化下显蓝色，酸性终止液转化为黄色。

检测：450 nm波长下测定吸光度（OD值），浓度与OD值呈正相关。

样本处理要求

血清：全血室温静置2小时或4℃过夜，1000×g离心20分钟，取上清；-20℃/-80℃保存，避免反复冻融。

血浆：EDTA或肝素抗凝，采集后30分钟内2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清检测或冻存。

组织/细胞上清：匀浆后离心取上清，蛋白浓度建议调整至1-10 mg/mL。

储存与稳定性

未开封试剂盒：2-8℃冷藏保存，有效期6个月。

开封后：剩余试剂按标签要求分装保存，避免反复冻融。

操作步骤

将试剂平衡至室温（20-25℃）。

加样：每孔依次加入标准品或样本50 μL，随后加入HRP标记抗体50 μL，37℃孵育60分钟。

洗涤：弃液后加洗涤液，静置30秒后甩干，重复5次。

显色：每孔加TMB底物90 μL，37℃避光孵育15分钟。

终止：每孔加终止液50 μL，立即测定OD值。

注意事项

避免试剂接触皮肤或黏膜，操作时需佩戴防护用具。

不同批次试剂不可混用，标准品需现配现用。

若样本浓度超出标准曲线范围，建议稀释后重测。

技术参数

检测范围：通常为1.56-100 ng/mL（具体以标准曲线为准）。

灵敏度：≤0.5 ng/mL。

精密度：板内变异系数（CV）<10%，板间CV<15%。

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