人肠病毒(Enterovirus)ELISA试剂盒

试剂盒基本原理

采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）：

预先包被人肠病毒捕获抗体的微孔板中，依次加入样本、标准品及HRP标记的检测抗体，经温育和洗涤后，通过底物TMB显色。

颜色深浅与样本中肠病毒含量呈正相关，用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

核心性能参数

参数 指标

灵敏度 低检测浓度＜0.1 mU/L（部分产品可达3.9 pg/ml）

特异性 不与其他可溶性结构类似物交叉反应

重复性 板内、板间变异系数均＜15%

有效期 6个月（2-8℃避光保存）

样本处理要求

血清/血浆：

血清：3000转离心10分钟分离上清；

血浆：EDTA/柠檬酸盐/肝素抗凝，3000转离心30分钟取上清。

细胞上清/组织匀浆：

细胞上清：离心10分钟去除颗粒；

组织匀浆：加生理盐水捣碎后离心取上清。

保存条件：

样本需分装冻存于-20℃，避免反复冻融；解冻后充分混匀。

操作流程要点

试剂准备：

试剂盒室温平衡20分钟，浓缩洗涤液加热溶解结晶后按1:20稀释。

加样与温育：

标准品孔加50μL梯度标准品，样本孔加10μL样本+40μL稀释液（稀释5倍），随后每孔加100μL HRP标记抗体，37℃温育60分钟。

洗板与显色：

手工/自动洗板5次（每孔加满洗涤液，静置1分钟后拍干）；加底物A、B各50μL，37℃避光孵育15分钟。

终止与读数：

每孔加50μL终止液，15分钟内在450nm波长测定OD值，结果需乘以稀释倍数（×5）。

注意事项

实验需自备酶标仪（450nm）、高精度加样器（0.5-1000μL）及37℃恒温箱。

底物需避光保存，温育时避免微孔干燥，洗板后确保孔内无残留液体。

样本中若含NaN₃会抑制HRP活性，不可检测；不同批号试剂不得混用。
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