产品参数
检测方法： 双抗体夹心酶联免疫吸附测定 (Sandwich ELISA)

目标种属： 人 (Human)

目标物： 人P物质受体 (Substance P Receptor), 也称为神经激肽1受体 (Neurokinin 1 Receptor, NK1R)

应用： 定量检测人血清、血浆、组织匀浆液、细胞裂解液等生物样本中的SP-R/NK1R蛋白浓度。

背景

P物质受体 (Substance P Receptor, SP-R)，即神经激肽1受体 (NK1R)，是一种主要与神经肽P物质 (Substance P) 结合的特异性G蛋白偶联受体 (GPCR)。NK1R在中枢和外周神经系统中广泛表达，参与疼痛感知、神经源性炎症、情绪调节（如焦虑、抑郁）、恶心呕吐（如化疗、术后）、哮喘和炎症性肠病等多种生理和病理过程。因此，准确检测生物样本中的NK1R蛋白表达水平对于研究其在这些过程中的作用机制、药物筛选、疾病诊断及疗效评估具有重要意义。

本试剂盒采用高度特异性的双抗体夹心ELISA原理，提供一种高灵敏度、高特异性的定量检测人源SP-R/NK1R的方法。

检测原理

本试剂盒采用经典的双抗体夹心法：

预包被抗体： 微孔板上预包被有抗人SP-R/NK1R单克隆抗体。

样品/标准品加入： 将样品或已知浓度的标准品加入预包被的微孔中。

抗原结合： 样品或标准品中的SP-R/NK1R蛋白与微孔板上的捕获抗体结合。

洗涤： 洗去未结合的物质。

生物素化检测抗体加入： 加入生物素标记的抗人SP-R/NK1R单克隆抗体（检测抗体），该抗体识别抗原（SP-R/NK1R）上的不同表位并与之结合，形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”复合物。

洗涤： 再次洗去未结合的检测抗体。

酶结合物加入： 加入辣根过氧化物酶 (HRP) 标记的链霉亲和素 (Streptavidin-HRP)。链霉亲和素与检测抗体上的生物素发生高亲和力结合。

洗涤： 洗去未结合的酶结合物。

底物显色： 加入无色的显色底物溶液 (如TMB)。HRP在H₂O₂存在下催化底物反应，生成蓝色产物。

终止反应： 加入终止液 (如酸性溶液，H₂SO₄)，使反应终止，溶液颜色由蓝变黄。

吸光度测定： 在450nm波长下（可能需要570nm或630nm作为参考波长扣除背景）立即用酶标仪测定各孔的吸光度 (OD值)。样品中的SP-R/NK1R浓度与测得的OD值成正比。

自备实验器材

移液器及相应吸头

精密连续移液器 (用于稀释标准品)

旋涡混合器

37±1℃恒温培养箱

酶标仪 (450nm为主波长, 570nm或630nm为参考波长)

洗板机或手动洗瓶

去离子水或蒸馏水 (用于稀释浓缩洗涤液、复溶标准品)

一次性离心管、样品管

吸水纸

样本要求

血清: 使用无热原、无内毒素采血管采集血液，室温静置30分钟使其自然凝固，然后4℃, 1000×g 离心20分钟，取上清。避免反复冻融。样本在4℃下可稳定48小时，-20℃或-80℃下长期保存。

血浆: 使用抗凝剂（推荐EDTA或肝素钠）采血，采血后30分钟内4℃, 1000×g离心20分钟，取上清。保存条件同血清。

组织匀浆液: 新鲜组织快速称重后，用预冷的PBS (或其他试剂盒指定的均质缓冲液) 按1:5至1:10 (w/v) 比例在冰浴条件下充分匀浆。4℃, 5000×g 离心5-10分钟，取上清测定。样本处理需加入适量蛋白酶抑制剂。

细胞裂解液: 培养细胞计数后，离心收集细胞，用预冷的PBS冲洗2遍。加入含有蛋白酶抑制剂的细胞裂解缓冲液（如RIPA裂解液），冰上裂解30分钟。4℃, 12000×g 离心15分钟，取上清测定。推荐采用BCA法或Bradford法测定裂解上清的总蛋白浓度，以便最终结果可表示为每mg总蛋白的NK1R含量。

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