产品概述

检测原理：双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（Sandwich ELISA）

检测范围：15.6–1000 pg/mL（典型范围，具体参照供应商数据）

灵敏度：≤ 5.0 pg/mL（最低检测限）

样本类型：血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、细胞裂解液、组织匀浆

保存条件：2–8°C（未开封）；拆封后标准品/抗体需-20°C保存

有效期：12个月

检测原理

预包被：微孔板预包被抗人 RCOR3 单克隆抗体（捕获抗体）。

结合：样本中 RCOR3 蛋白与捕获抗体结合。

检测：加入生物素标记的抗人 RCOR3 二抗（检测抗体），形成抗体-抗原-抗体复合物。

信号放大：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素（Streptavidin）。

显色：加入TMB底物，HRP催化显色（蓝色→黄色）。

读数：450nm波长下测定吸光度（OD值），RCOR3浓度与OD值成正比。

试剂盒组成

（96T为例）

| 组件名称 | 数量/规格 | 保存条件 |

| 预包被抗人RCOR3微孔板 | 12条×8孔 | 2–8°C |

| 人RCOR3标准品 | 2 支（冻干粉） | -20°C（复溶后）|

| 生物素标记抗人RCOR3抗体 | 1瓶（120 μL） | -20°C |

| HRP标记链霉亲和素 | 1瓶（120 μL） | -20°C |

| TMB底物溶液 | 1瓶（11 mL） | 2–8°C（避光） |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 1瓶（12 mL） | 2–8°C |

| 洗涤缓冲液（20×浓缩） | 1瓶（30 mL） | 2–8°C |

| 样本稀释液 | 1瓶（20 mL） | 2–8°C |

| 封板膜 | 3张 | 室温 |

样本处理

| 样本类型 | 预处理方法 |

| 血清 | 室温静置30分钟，3000×g离心10分钟，取上清检测。避免反复冻融。 |

| 血浆 | EDTA/肝素抗凝管收集，离心取上清（同上）。 |

| 细胞裂解液| RIPA裂解后，12000×g离心5分钟，取上清用稀释液适当稀释（需预实验确定倍数）。 |

| 组织匀浆 | 按1:5（w/v）加PBS匀浆，离心后取上清。 |

操作步骤

（96T板，室温平衡30分钟后进行）

标准品稀释：用样本稀释液复溶标准品，梯度稀释为6个浓度（如1000、500、250、125、62.5、31.25、15.6 pg/mL）。

加样：

标准品孔：100 μL/孔（复孔）

样本孔：100 μL/孔（复孔）

空白孔：仅加稀释液

孵育：37°C孵育90分钟。

洗板：弃液，每孔加300 μL洗涤液（1×稀释），静置30秒后弃去，重复4次，拍干。

加检测抗体：每孔加100 μL生物素化抗体，37°C孵育60分钟。

洗板：同上，重复4次。

加酶结合物：每孔加100 μL HRP-链霉亲和素，37°C避光孵育30分钟。

洗板：同上，重复5次。

显色：每孔加90 μL TMB底物，37°C避光反应15–30分钟（显蓝色）。

终止：每孔加50 μL终止液（变黄色）。

检测：5分钟内于酶标仪450nm读OD值（校正波长570nm/630nm）。

结果计算

计算复孔平均OD值，减去空白孔OD值。

以标准品浓度为横坐标（log值），OD值为纵坐标，绘制标准曲线（四参数拟合Logistic曲线）。

根据样本OD值从曲线方程计算浓度。

公式示例：

[ C = 10^{\left( \frac{\text{OD} - b}{m} \right)} ]

（b：截距，m：斜率，具体以拟合曲线为准）

注意事项

精密度：板内变异系数（CV）< 10%，板间CV < 15%。

回收率：在标准品中添加回收试验，回收率范围应为85–115%。

特异性：不与RCOR1、RCOR2等类似蛋白交叉反应。

干扰物：避免使用NaN₃、高脂血、溶血样本。

安全提示：终止液含硫酸，佩戴手套操作；TMB避免接触皮肤。

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