实验原理

本试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。预先包被抗大鼠HSP47抗体的微孔板中依次加入样本、标准品及HRP标记的检测抗体，经温育和洗涤后，加入底物TMB显色。TMB在过氧化物酶催化下转化为蓝色，酸化后变为黄色，其颜色深度与样本中HSP47浓度呈正相关。通过酶标仪测定450 nm波长下的吸光度（OD值），计算样本浓度。

试剂盒组成

预包被微孔板：抗大鼠HSP47抗体包被的96孔或48孔板。

标准品：浓度梯度的大鼠HSP47蛋白溶液。

检测抗体：HRP标记的抗大鼠HSP47抗体。

底物溶液（TMB）：显色反应底物。

终止液：酸性溶液，终止显色反应。

洗涤缓冲液：20×浓缩液，需稀释后使用。

其他辅助试剂：样本稀释液、封板膜等。

样本处理要求

血清样本：

全血室温静置2小时或4℃过夜，1000×g离心20分钟，取上清。

短期保存于-20℃，长期保存于-80℃，避免反复冻融。

血浆样本：

使用EDTA或肝素抗凝，采集后30分钟内2-8℃离心（1000×g，15分钟），取上清检测或保存（同血清条件）。

操作步骤

加样：每孔加入标准品或样本50 μL，随后加入50 μL检测抗体（HRP标记）。

温育：37℃孵育60分钟，洗涤5次。

显色：每孔加入TMB底物100 μL，避光反应15分钟。

终止：加入50 μL终止液，颜色由蓝转黄。

检测：450 nm波长下读取OD值，绘制标准曲线并计算样本浓度。

注意事项

试剂使用前需平衡至室温（20-25℃）。

避免交叉污染，不同标准品或样本需更换吸头。

洗涤步骤需彻底，避免残留影响结果。

显色时间需严格控制，终止后10分钟内完成检测。

性能参数

检测范围：通常为0.156-10 ng/mL（具体以标准曲线为准）。

灵敏度：≤0.1 ng/mL。

精密度：板内变异系数（CV）<10%，板间CV<15%。

储存条件

未开封试剂盒2-8℃保存，有效期6个月；开封后微孔板需密封防潮，其他组分按标签要求存放。

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