大鼠胱天蛋白酶3(Casp-3)ELISA试剂盒

检测原理

采用双抗体夹心法检测大鼠样本中Casp-3活性。预包被抗Casp-3抗体的微孔板捕获目标蛋白，加入生物素标记的二抗形成复合物，通过辣根过氧化物酶（HRP）催化TMB显色。450nm波长下测定吸光度（OD值），OD值与Casp-3浓度呈正相关，标准曲线定量。

试剂盒组分

| 组分 | 48T规格 | 96T规格 | 保存条件 |

| 预包被酶标板 | 8×6条 | 8×12条 | 2-8℃干燥密封 |

| Casp-3标准品 | 6管（0-20 ng/mL）| 6管（0-20 ng/mL）| -20℃（避免反复冻融）|

| 生物素化检测抗体 | 60μL（100×） | 120μL（100×） | -20℃避光 |

| TMB显色液（A/B） | 各3mL | 各6mL | 避光2-8℃ |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 6mL | 12mL | 室温 |

| 20×浓缩洗涤液 | 30mL | 60mL | 室温稀释后使用 |

样本处理

血清/血浆：采集后3000rpm离心10分钟，避免溶血，-80℃长期保存（避免反复冻融）。

组织匀浆：按1:9（w/v）比例加入PBS冰浴匀浆，离心取上清，建议稀释10-50倍后检测。

细胞裂解液：RIPA裂解后离心，蛋白浓度建议调整至1-2 mg/mL。

实验步骤

加样：每孔加入100μL标准品或样本，37℃孵育60分钟。

洗涤：弃液拍干，每孔加1×洗涤液200μL，重复3次。

孵育二抗：加入100μL生物素化抗体（1:100稀释），37℃孵育30分钟。

显色：加入TMB底物100μL，避光反应15分钟。

终止与检测：加50μL终止液，30分钟内测定450nm OD值（参考波长630nm）。

数据分析

以标准品浓度（ng/mL）为横坐标，OD值为纵坐标，拟合四参数逻辑曲线（4PL）。

样本浓度需乘以稀释倍数（如组织匀浆稀释50倍则×50）。

注意事项

质量控制：建议设置复孔，CV值应＜15%；标准曲线R²≥0.99。

干扰规避：高脂样本需离心去脂，避免使用叠氮钠防腐剂。

安全操作：终止液为强酸，需佩戴防护装备。

稳定性：未开封试剂盒有效期12个月，开封后组分按标签条件保存。

技术参数

检测范围：0.312-20 ng/mL（灵敏度0.13 ng/mL）。

交叉反应：与大鼠Casp-7、Casp-8无显著交叉。

批间差：≤10%。
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