大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA试剂盒

实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法。预先包被抗大鼠Casp-9抗体的微孔板中依次加入样本、标准品及辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。洗涤后加入底物TMB显色，TMB在HRP催化下转化为蓝色，终止液（酸性溶液）作用后变为黄色。在450nm波长下测定吸光度（OD值），样本中Casp-9浓度与OD值呈正相关，通过标准曲线计算浓度。

检测种属：大鼠（适用于血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清等样本）

检测原理：双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）

样本处理要求

血清：全血室温静置2小时或4℃过夜后，1000×g离心20分钟，取上清；避免反复冻融。

血浆：使用EDTA或肝素抗凝，采集后30分钟内2-8℃离心（1000×g，15分钟），分离上清。

组织匀浆：

用预冷PBS（0.01M, pH7.4）冲洗组织，去除血液后剪碎。

按重量体积比1:9加入PBS（含蛋白酶抑制剂），冰上匀浆后离心（5000×g，5-10分钟）取上清。

细胞培养上清：直接离心（1000×g，20分钟）后检测或-20℃保存。

注意：

溶血或脂血样本可能干扰结果，需避免使用。

长期保存建议分装，避免反复冻融。

试剂盒组成

96T配置：

包被微孔板：8孔×12条

标准品（冻干粉）：2瓶（临用前稀释至100 ng/ml，梯度稀释为50、25、12.5、6.25、3.12、1.56 ng/ml）

样本稀释液：6 mL

HRP标记检测抗体、TMB显色液、终止液、洗涤缓冲液（浓缩液需稀释）

需自备器材

酶标仪（450nm滤光片）

精密移液器及枪头（0.5-1000μL范围）

37℃恒温箱

蒸馏水或去离子水（配制洗涤液）

操作步骤

标准品制备：临用前15分钟内用稀释液复溶，梯度稀释后使用。

加样：每孔依次加入标准品或样本50μL，随后加入HRP标记抗体50μL，37℃孵育60分钟。

洗涤：弃液后加洗涤液，静置30秒后甩干，重复5次。

显色：每孔加TMB底物90μL，37℃避光显色15分钟。

终止与检测：加终止液50μL，15分钟内测定450nm OD值。

结果计算

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过曲线方程计算样本浓度。
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