大鼠高铁血红蛋白(MHB)ELISA试剂盒

实验原理

本试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。预先包被抗大鼠MHB抗体的微孔板中依次加入样本、标准品及HRP标记的检测抗体，经温育洗涤后，通过底物TMB显色。TMB在过氧化物酶催化下转化为蓝色，酸性终止后呈黄色，颜色深度与样本中MHB浓度正相关。最终在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算浓度。

样本处理要求

血清：全血室温静置2小时或4℃过夜，1000×g离心20分钟取上清，-20℃/-80℃保存，避免反复冻融。

血浆：EDTA或肝素抗凝采集，30分钟内2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清检测或保存（-20℃/-80℃）。

试剂盒保存与稳定性

未开封：-20℃保存（有效期6个月）；频繁使用：2-8℃短期存放。

注意事项：

浓洗涤液低温可能析出结晶，需37℃水浴助溶后使用。

开封酶标板未用完需密封保存，避免受潮。

操作关键步骤

平衡：试剂盒使用前需室温平衡15-30分钟。

加样：推荐使用校准加样器，单次加样时间控制在5分钟内，高浓度样本需预稀释。

洗涤：彻底洗涤避免背景干扰，建议使用排枪提高效率。

显色：TMB避光保存，显色反应需严格计时。

结果计算

标准曲线需同步测定（建议复孔），样本OD值超过标准曲线范围时，按稀释倍数校正。

计算公式：样本浓度=标准曲线拟合值×稀释倍数。

注意事项

质量控制：每批次实验需包含标准品及质控样本。

安全处理：所有接触样本的耗材按生物危害废物处理。

批间差异：不同批号试剂组分不可混用。

预期应用

定量检测大鼠血清、血浆或细胞培养上清等生物液体中的MHB含量。
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