检测原理

本试剂盒采用竞争性酶联免疫吸附测定 (Competitive ELISA) 原理，定量检测大鼠样本中的前列腺素 F2α (PGF2α)。

原理简述如下：

预包被： 微孔板孔内预先包被有抗 PGF2α 抗体 (捕获抗体)。

竞争反应： 同时向孔中加入：

待测样本 (或标准品) 中的 PGF2α： 样本中的 PGF2α 是“天然抗原”。

生物素标记的 PGF2α (Biotin-PGF2α)： 这是“标记抗原”。

孵育： 在孵育过程中，样本中的 PGF2α 和 Biotin-PGF2α 竞争性地与包被在孔壁上的有限数量的捕获抗体结合位点结合。

洗涤： 洗去未结合的物质。

酶结合物反应： 加入辣根过氧化物酶 (HRP) 标记的链霉亲和素 (Streptavidin-HRP)。链霉亲和素会与 Biotin-PGF2α 上的生物素特异性结合。

洗涤： 再次洗去未结合的 Streptavidin-HRP。

显色： 加入显色底物 (TMB)。在 HRP 酶的催化下，无色的 TMB 转化为蓝色的产物。

终止反应： 加入终止液 (通常是酸性溶液)，使反应停止，溶液颜色由蓝色变为黄色。

比色测定： 在酶标仪上读取 450 nm 波长处的吸光度 (OD 值)。

结果判读：

样本中 PGF2α 浓度越高，与抗体结合的 Biotin-PGF2α 就越少，后续与 HRP 结合的 Biotin-PGF2α 也越少，催化产生的蓝色产物就越少，最终测得的 OD450 值就越低。

样本中 PGF2α 浓度越低，与抗体结合的 Biotin-PGF2α 就越多，测得的 OD450 值就越高。

通过绘制标准品浓度与对应 OD 值的标准曲线 (通常为反 S 形曲线)，即可计算出待测样本中 PGF2α 的浓度。

试剂盒组成与储存

| 组分名称 | 规格/数量 | 储存条件 (开封后) | 备注 |

| 预包被抗 PGF2α 抗体微孔板 | 12 条 x 8 孔 | 2-8°C (干燥) | 铝箔袋密封，内含干燥剂。 |

| PGF2α 标准品 | 2 瓶 (冻干粉) | -20°C | 使用前按说明书溶解复溶，并稀释成系列浓度。 |

| 生物素标记的 PGF2α (Biotin-PGF2α) | 1 瓶 (浓缩液) | -20°C | 使用前按说明书稀释。 |

| 链霉亲和素-HRP (SA-HRP) | 1 瓶 (浓缩液) | -20°C | 使用前按说明书稀释。 |

| 标准品/样本稀释液 | 1 瓶 (缓冲液) | 2-8°C | 用于稀释标准品和部分样本。 |

| 浓缩洗涤液 (20X) | 1 瓶 | 室温 (RT) 或 2-8°C | 使用前用去离子水或蒸馏水稀释 20 倍。 |

| 显色底物 (TMB A + TMB B) | 各 1 瓶 | 2-8°C (避光) | 临用前等体积混合。避免接触皮肤。 |

| 终止液 | 1 瓶 | RT | 通常为 1M 或 2M 硫酸。有强腐蚀性，小心操作！ |

| 封板膜 | 若干张 | RT | 用于孵育步骤覆盖微孔板。 |

| 产品说明书 | 1 份 | | |

样本收集与处理

血清： 血液采集后室温静置 30 分钟至 1 小时凝固，然后 1000 × g 离心 15 分钟 (2-8°C)。小心吸取上层血清，避免溶血。立即分装检测或 -80°C 保存。

血浆： 使用肝素钠或 EDTA 作为抗凝剂。采集后立即轻柔混匀，1000 × g 离心 15 分钟 (2-8°C)。小心吸取上层血浆，避免吸取血细胞。立即分装检测或 -80°C 保存。避免使用肝素锂或柠檬酸盐，可能干扰检测。

细胞培养上清液： 离心去除细胞碎片，取上清液。立即检测或 -80°C 保存。

组织匀浆液：

取适量组织 (如 50-100mg)，用预冷的 PBS (pH 7.2-7.4) 或生理盐水冲洗干净，吸干水分。

加入适量预冷的 PBS (建议比例 1:9 w/v，例如 100mg 组织加 900μL PBS)。

在冰浴条件下，用匀浆器充分匀浆。

将匀浆液 5000 × g 离心 5-10 分钟 (2-8°C)。

小心吸取上清液进行检测或分装于 -80°C 保存。

建议测定总蛋白浓度，结果可用 pg/mg protein 表示。

样本处理注意事项：

快速处理： PGF2α 不稳定，样本收集后应尽快处理并冷冻保存。

避免冻融： 反复冻融会显著降解 PGF2α。分装保存，每管仅解冻一次用于检测。

离心温度： 必须在 2-8°C 下离心血清/血浆/匀浆液。

样本稀释： 如果预期浓度高于检测范围上限，需用试剂盒提供的标准品/样本稀释液进行稀释。不要用 PBS 或培养基直接稀释，因其成分可能影响检测。记录稀释倍数 (DF)，最终浓度 = 测定值 × DF。

浑浊样本： 离心去除沉淀后再检测。

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