人白介素6(IL-6)ELISA试剂盒

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ABC-ELISA）。通过抗人IL-6单克隆抗体预包被酶标板，样本中的IL-6与固相抗体结合后，加入生物素化抗人IL-6抗体形成复合物，再与辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素结合。加入TMB底物显色后，终止反应并在450 nm波长下测定吸光度（OD值），IL-6浓度与OD值呈正比，通过标准曲线定量样本中IL-6含量。

适用范围

适用于检测人血清、血浆（EDTA/柠檬酸盐/肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等生物样本中的IL-6含量。

试剂盒组成

96孔预包被酶标板

标准品（20 ng/瓶）：2瓶，需稀释后使用

酶标抗体工作液（HRP标记）：12 mL

生物素化抗体工作液：12 mL

10×标本稀释液：12 mL（使用前需1:10稀释）

20×浓缩洗涤液：50 mL（使用前需1:20稀释）

TMB底物工作液：12 mL

终止液：12 mL

封板膜

样本处理与保存

样本收集：

血清：室温血液凝固后离心（1000×g，20分钟）分离血清。

血浆：抗凝全血离心后取上清（避免溶血）。

细胞培养上清：离心去除颗粒后检测。

保存条件：

2~8℃可保存48小时，长期保存需分装并于-20℃或-70℃冻存，避免反复冻融。

操作步骤

试剂准备：

稀释标准品：按说明书梯度稀释（如0.5、1、2、4、8、16 ng/mL）。

稀释洗涤液：20×浓缩液按1:20比例用蒸馏水稀释。

加样与孵育：

每孔依次加入标准品或样本100 μL，37℃孵育90分钟。

洗涤后加入生物素化抗体工作液100 μL，37℃孵育60分钟。

洗涤后加入酶标工作液100 μL，37℃避光孵育30分钟。

显色与终止：

加入TMB底物100 μL，避光显色15~30分钟。

加入终止液50 μL，30分钟内测定OD值（450 nm）。

结果计算

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过曲线方程计算样本中IL-6浓度。

注意事项

试剂盒需2~8℃保存，使用前平衡至室温。

避免交叉污染，不同样本需更换吸头。

显色时间需严格控制，避免过度反应。

若样本浓度超出标准曲线范围，需进一步稀释后复测。

性能参数

灵敏度：<0.1 ng/mL

检测范围：0.5~16 ng/mL

批内/批间变异系数：<10%
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