人白介素9(IL-9)ELISA试剂盒

检测原理

采用双抗体夹心法，通过包被抗人IL-9单克隆抗体的微孔板捕获样本中的IL-9，再结合辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，经显色反应后测定450nm波长下的吸光度（OD值），计算目标蛋白浓度。

试剂盒组成

预包被微孔板：抗人IL-9抗体包被的96孔板（剩余板条需密封保存于4℃）。

标准品：冻干或液体形式，含6个浓度梯度（需复溶或稀释）。

检测抗体：HRP标记的抗人IL-9抗体。

洗涤液：10×浓缩液，使用前稀释。

底物A/B：TMB显色液。

终止液：2M硫酸溶液。

封板膜：用于温育时密封孔板。

操作步骤

样本准备

血清/血浆：建议离心后取上清，避免溶血或脂血干扰。

细胞培养上清：离心去除沉淀。

实验流程

平衡：试剂盒室温平衡20-30分钟。

加样：

标准品孔：加入50μL不同浓度标准品。

样本孔：加入10μL样本+40μL稀释液（按说明书比例）。

空白孔：仅加稀释液。

孵育：37℃避光孵育60分钟，洗板5次。

加酶标抗体：每孔加入HRP标记抗体100μL，37℃孵育60分钟，洗板5次。

显色：每孔加底物A/B各50μL，避光反应15分钟。

终止与检测：加入终止液50μL，15分钟内测定450nm OD值。

注意事项

样本处理：避免反复冻融，建议分装保存于-80℃。

温育控制：严格计时，避免温度波动。

洗板：确保每孔加满洗涤液，避免交叉污染。

标准曲线：需复测高值样本时，建议稀释后重测。

技术参数

检测范围：通常为15.6-1000 pg/mL（具体以试剂盒为准）。

灵敏度：≤5 pg/mL。

精密度：批内CV<10%，批间CV<15%。

保存条件：未开封试剂盒2-8℃保存，开封后按组分要求存放。
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