产品概述

本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA），用于定量检测大鼠血清、血浆及相关液体样本中吡啶酚(PYD)的含量。检测范围为10–250 nmol/L，适用于96孔板规格。

实验原理

包被抗体：微孔板预包被纯化的大鼠PYD抗体。

抗原-抗体结合：样本中的PYD与固相抗体结合后，加入HRP标记的检测抗体形成复合物。

显色反应：经洗涤后加入底物TMB，在HRP催化下显蓝色，酸性终止液转化为黄色，其吸光度（OD值）与样本中PYD浓度呈正相关。

定量分析：通过450nm波长测定OD值，参照标准曲线计算浓度。

试剂盒组成

30倍浓缩洗涤液（20mL×1瓶）

HRP标记检测抗体（100μL×1瓶）

底物A、B（各50μL×1瓶）

终止液（6mL×1瓶）

标准品（浓度梯度）

封板膜、说明书等

样本处理要求

血清：全血室温静置2小时或4℃过夜，1000×g离心20分钟，取上清保存于-20℃（避免反复冻融）。

血浆：EDTA或肝素抗凝，采集后30分钟内2–8℃离心（1000×g，15分钟），取上清检测或保存。

操作步骤

平衡与分装：板条室温平衡20分钟，剩余板条密封后4℃保存。

加样：

标准品孔：加入不同浓度标准品50μL。

样本孔：先加待测样本10μL，再加稀释液40μL。

空白孔：不加任何液体。

孵育：每孔加入HRP标记抗体100μL，37℃孵育60分钟。

洗涤：手工或洗板机清洗5次（每孔加洗涤液静置1分钟）。

显色：每孔加底物A/B各50μL，37℃避光孵育15分钟。

终止与检测：加终止液50μL，15分钟内测定450nm OD值。

自备器材

酶标仪（450nm）

精密移液器及枪头（0.5–1000μL范围）

37℃恒温箱

注意事项

试剂使用前需充分混匀，避免反复冻融。

洗涤过程需彻底，防止非特异性结合。

样本避免溶血或脂血，否则可能影响结果。

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