大鼠基质金属蛋白酶13(MMP-13)ELISA试剂盒

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA原理：

预包被抗大鼠MMP-13抗体捕获样本中的MMP-13。

加入生物素标记的检测抗体形成复合物。

通过辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素催化显色底物（TMB），在450nm波长下测定吸光度（OD值），其强度与MMP-13浓度成正比。

试剂盒组成

| 组分 | 规格（96T） | 备注 |

| 预包被微孔板 | 1块 | 可拆卸，抗大鼠MMP-13抗体包被 |

| 标准品（重组MMP-13）| 6管 | 浓度：0、50、100、200、500、1000 pg/mL |

| 样本稀释液 | 15mL | PBS缓冲液（含蛋白稳定剂） |

| 生物素标记抗体 | 1.5mL | 避光保存 |

| HRP-链霉亲和素 | 1.5mL | 避光保存 |

| TMB显色液 | 10mL | 避光保存 |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 10mL | 腐蚀性，谨慎操作 |

| 洗涤液（20×） | 50mL | 使用前稀释至1× |

样本要求

血清/血浆：采集后离心去除颗粒，-20℃保存，避免反复冻融。

组织匀浆：按重量体积比1:9加入PBS匀浆，离心取上清。

细胞上清：离心去除沉淀后检测。

建议稀释比例：通常无需稀释，若OD值超标准曲线范围，用样本稀释液调整。

操作步骤

标准品与样本准备：将标准品按梯度稀释，样本按需处理。

加样：每孔加入100μL标准品或样本，37℃孵育90分钟。

洗涤：弃液后拍干，加入1×洗涤液洗涤3次。

加检测抗体：每孔加入100μL生物素标记抗体，37℃孵育60分钟。

加酶结合物：洗涤后加入100μL HRP-链霉亲和素，37℃避光孵育30分钟。

显色：洗涤后加入90μL TMB，37℃避光显色15-20分钟。

终止反应：加入50μL终止液，颜色由蓝变黄。

检测：450nm波长读取OD值（建议双波长校正：630nm）。

结果计算

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线（推荐四参数拟合）。

根据样本OD值从曲线中计算浓度，稀释样本需乘以稀释倍数。

性能参数

灵敏度：≤10 pg/mL

检测范围：15.6-1000 pg/mL

精密度：板内CV<8%，板间CV<10%

特异性：不与大鼠其他MMP家族成员交叉反应。

注意事项

试剂使用前平衡至室温，避免反复冻融。

终止液为强酸，需小心操作。

若样本浓度过高，需适当稀释后复测。
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