检测原理

采用双抗体夹心法。将纯化的小鼠TNF-β抗体包被于微孔板，形成固相抗体。样本中的TNF-β与固相抗体结合后，加入HRP标记的检测抗体形成复合物，经洗涤后加入TMB底物显色。显色强度与样本中TNF-β浓度呈正相关，通过450nm波长测定吸光度（OD值）定量分析。

适用范围

用于检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清等液体样本中的TNF-β含量。

试剂盒组成

预包被微孔板（96孔或48孔）

TNF-β标准品（浓度梯度）

酶标试剂（HRP标记抗体）

样本稀释液

TMB显色液

终止液

洗涤缓冲液（20×浓缩液）

封板膜、说明书及质检报告

保存条件

未开封试剂盒2-8℃保存，有效期12个月；开封后酶标板需密封防潮，标准品分装冻存（-20℃）。

操作步骤

标准品稀释：按说明书梯度稀释至工作浓度。

加样：每孔加入标准品或样本100μL，37℃孵育90分钟。

洗涤：弃液后拍干，加洗涤液静置30秒，重复5次。

加酶标试剂：每孔加HRP标记抗体100μL，37℃孵育60分钟。

显色：洗涤后加TMB 90μL，避光反应15-30分钟。

终止：加终止液50μL，15分钟内测定OD450nm。

结果计算

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过回归方程计算样本浓度（需乘以稀释倍数）。

注意事项

避免反复冻融样本；

严格控制反应温度和时间；

显色后若出现沉淀，需离心后检测；

不同批次试剂不可混用。

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