检测原理

采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。预先包被抗体的微孔板中依次加入样本、标准品及HRP标记检测抗体，经温育洗涤后，通过TMB显色反应（蓝色→黄色）测定450nm吸光度（OD值），样本浓度与OD值呈正相关。

样本要求

血清/血浆：全血室温静置2小时或4℃过夜后，1000×g离心20分钟取上清，-20℃/-80℃保存，避免反复冻融。

其他样本：细胞上清液、组织匀浆等需离心去除颗粒物，澄清后检测。

试剂盒组分

预包被微孔板

标准品、检测抗体、TMB底物

洗涤缓冲液（浓缩液需稀释）

终止液、封板膜（一次性使用）

操作步骤

平衡：试剂盒从2-8℃取出后室温平衡15-30分钟。

加样：每孔加入样本或标准品50μL，建议复孔检测，加样时间控制在5分钟内。

孵育：37℃温育30-60分钟，彻底洗涤5次。

显色：加入TMB避光反应10-15分钟，终止后30分钟内读数。

注意事项

洗涤液：若有结晶，37℃水浴溶解后使用。

高浓度样本：若OD值超过标准曲线范围，需用稀释液调整后重新检测，最终浓度乘以稀释倍数。

质量控制：每次实验需同步绘制标准曲线。

保存：未使用的板条需密封保存于2-8℃，底物避光。

技术参数

检测范围：通常为15.6-1000 pg/mL（具体以实际标准曲线为准）。

灵敏度：<5 pg/mL。

批间差：CV≤15%。

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