大鼠肝细胞生长因子(HGF)ELISA试剂盒

检测原理

采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）：

预包被HGF抗体的微孔板中加入样本、标准品和HRP标记检测抗体。

温育洗涤后，加入底物TMB显色（蓝色→黄色）。

颜色深浅与HGF浓度正相关，于450nm波长测定OD值计算浓度。

样本要求

类型：血清、血浆（EDTA/柠檬酸盐/肝素抗凝）、细胞上清液。

处理：

血清/血浆：3000 rpm离心（血清10分钟，血浆30分钟），分离上清。

细胞上清：3000 rpm离心10分钟去除颗粒。

保存：-20℃冻存，避免反复冻融；禁止含NaN3（抑制HRP活性）。

试剂盒组成

（以96孔配置为例）

| 组分 | 体积/数量 |

| 预包被酶标板 | 96孔 |

| HGF标准品（400ng/ml）| 0.6ml |

| 生物素标记检测抗体 | 6ml |

| HRP标记亲和链酶素 | 10ml |

| 底物A/B | 各6ml |

| 终止液 | 6ml |

| 30×浓缩洗涤液 | 20ml（需稀释）|

| 标准品稀释缓冲液 | 5ml |

注：48孔配置用量减半，浓缩洗涤液按1:30稀释后使用。

操作步骤

标准品稀释（示例）：

1号管：原液400ng/ml（直接使用）。

2号管：150μl 1号标准品 + 150μl稀释液 → 200ng/ml。

3号管：150μl 2号标准品 + 150μl稀释液 → 100ng/ml（梯度稀释至所需浓度）。

加样：

分别加入标准品、样本各50μl至对应孔。

加入50μl生物素标记抗体，37℃温育60分钟。

洗涤：弃液后加洗涤液，静置30秒甩干，重复5次。

显色：每孔加底物A/B各50μl，避光37℃反应15分钟。

终止：每孔加50μl终止液（颜色变黄）。

检测：30分钟内测450nm OD值（建议设630nm双波长校正）。

注意事项

安全性：

避免接触终止液/底物，若接触立即冲洗。

实验过程中禁止饮食、化妆。

试剂管理：

使用前平衡至室温，标准品稀释后不可保存。

不同批号试剂禁止混用，剩余板条密封防变质。

实验操作：

使用一次性吸头避免交叉污染。

严格按照温育时间及洗涤次数操作。
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