产品用途

本试剂盒用于定量检测小鼠血清、血浆或其他生物液体样本中骨桥素（Osteopontin, OPN）的含量。适用于医学研究、肿瘤学、免疫学及代谢相关领域的实验分析。

实验原理

采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将纯化的小鼠OPN抗体预包被于微孔板，形成固相抗体。加入样本后，样本中的OPN与固相抗体结合，再与辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。经洗涤后，加入底物TMB显色，在HRP催化下产生蓝色产物，酸化后转为黄色。颜色的深浅与样本中OPN浓度呈正相关，通过450 nm波长测定吸光度（OD值），依据标准曲线计算浓度。

试剂盒组成

48孔配置 | 96孔配置

酶标包被板：1×48孔 | 1×96孔（2-8℃保存）

标准品（45 μg/L）：0.5 mL×1瓶 | 0.5 mL×1瓶（2-8℃保存）

标准品稀释液：1.5 mL×1瓶 | 1.5 mL×1瓶

酶标试剂：3 mL×1瓶 | 6 mL×1瓶

样品稀释液：3 mL×1瓶 | 6 mL×1瓶

显色剂A/B液：各3 mL×1瓶 | 各6 mL×1瓶

终止液：3 mL×1瓶 | 6 mL×1瓶

封板膜：2片 | 2片

密封袋：1个 | 1个

说明书：1份 | 1份

样本要求

样本类型：血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、细胞培养上清液等。

处理建议：避免反复冻融，离心去除颗粒物，2-8℃短期保存（≤24小时），长期保存需分装于-20℃或-80℃。

操作步骤

标准品稀释：按说明书梯度稀释。

加样：每孔依次加入标准品或样本，37℃孵育30分钟。

洗涤：弃液后拍干，加入洗涤液静置30秒，重复5次。

加酶标试剂：每孔加入HRP标记抗体，37℃孵育30分钟。

显色：加入TMB底物，避光反应15分钟。

终止：加入终止液，15分钟内测定OD值。

计算与分析

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过四参数拟合（推荐）或直线回归计算样本浓度。

注意事项

试剂使用前需平衡至室温，避免交叉污染。

显色时间需严格控制，终止后颜色不稳定。

若样本浓度超出标准曲线范围，需适当稀释后复测。

性能参数

灵敏度：≤1.0 μg/L

检测范围：1.5-45 μg/L

批内/批间变异系数：＜10%

储存与有效期

储存条件：2-8℃避光保存（开封后需密封）。

有效期：6个月（详见外包装标签）。

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