大鼠阿立新A(Orexin A)ELISA试剂盒

产品概述

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），用于体外定量检测大鼠血清、血浆、组织匀浆、脑脊液及细胞培养上清等样本中的阿立新A（Orexin A）含量。试剂盒具有高灵敏度、高特异性及良好的重复性，适用于科研用途，不可用于临床诊断。

检测原理

包被抗体：微孔板预包被抗大鼠Orexin A特异性抗体，形成固相载体。

样本孵育：加入待测样本或标准品，Orexin A与固相抗体结合。

生物素化抗体：加入生物素标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-抗体”复合物。

酶标记物：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，与生物素结合。

显色反应：加入TMB底物，在HRP催化下显蓝色，终止液（稀硫酸）作用后转为黄色。

定量分析：450 nm波长下测定吸光度（OD值），样本浓度与OD值呈正相关，通过标准曲线计算含量。

试剂盒组成

预包被微孔板：96孔或48孔（可拆卸）

标准品：重组大鼠Orexin A冻干粉（需复溶）

样本稀释液：PBS缓冲液（含保护剂）

生物素化检测抗体

HRP标记链霉亲和素

TMB显色液

终止液：2 M硫酸

洗涤液（20×浓缩液）：需稀释后使用

封板膜

说明书及标准曲线模板

样本要求

血清/血浆：建议使用EDTA或肝素抗凝，避免溶血，离心后取上清。

组织匀浆：按重量体积比（1:9）加入PBS匀浆，离心后取上清。

细胞上清：离心去除沉淀，避免反复冻融。

保存条件：2-8℃可短期保存（≤24小时），长期需分装冻存于-20℃以下。

操作步骤

标准品稀释：按说明书梯度稀释至0.5–1000 pg/mL。

加样：每孔加入标准品或样本100 μL，37℃孵育90分钟。

洗涤：弃液体，每孔加洗涤液300 μL，重复3次。

加检测抗体：每孔加入生物素化抗体100 μL，37℃孵育60分钟。

加酶结合物：每孔加入HRP标记物100 μL，37℃避光孵育30分钟。

显色：加入TMB底物100 μL，室温避光反应15分钟。

终止与检测：加入终止液50 μL，立即于450 nm读取OD值。

注意事项

储存条件：未开封试剂盒2-8℃保存，开封后按组分要求存放（部分需-20℃）。

避免污染：使用一次性吸头，不同试剂避免交叉接触。

复溶标准品：需静置10分钟后再稀释，避免剧烈震荡。

显色控制：若标准品最高孔OD值＜1.0，可适当延长显色时间（≤20分钟）。

结果计算

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线（推荐四参数拟合）。

根据样本OD值，从曲线中计算Orexin A浓度。若样本需稀释，最终浓度需乘以稀释倍数。

技术参数

检测范围：1.0–500 pg/mL（灵敏度≤0.3 pg/mL）

批内变异系数（CV）：＜10%

批间变异系数（CV）：＜15%

回收率：85–115%

交叉反应：与大鼠Orexin B无显著交叉（＜0.1%）。
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