人高尔基蛋白73(GP-73)ELISA试剂盒

产品概述

本试剂盒用于定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中高尔基蛋白73（GP-73）的浓度，采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）原理，适用于科研用途，不用于临床诊断。

检测原理

固相抗体结合：微孔板预包被抗人GP-73抗体，加入校准品或待测样本后，GP-73与固相抗体结合。

酶标抗体反应：加入HRP标记的抗人GP-73抗体，形成“固相抗体-抗原-酶标抗体”复合物。

显色与测定：加入底物（TMB）后，HRP催化底物显色（蓝色→黄色），终止反应后于450nm波长测定吸光度（OD值），OD值与GP-73浓度正相关。

试剂盒组成

预包被微孔板

GP-73校准品

HRP标记抗体

底物A/B液

终止液（2M硫酸）

洗涤缓冲液（需自备或按说明书配制）

样本要求

血清/血浆：避免溶血，离心（4000rpm，20min）后分装，-20℃保存，避免反复冻融。

细胞上清：离心去除颗粒物，-20℃保存。

注意事项：禁用叠氮钠防腐。

操作步骤

平衡试剂：使用前将所有组分室温平衡30-60分钟。

加样：

加入校准品或样本（100μL/孔），孵育（建议37℃ 1小时）。

洗涤3次（建议使用洗板机，避免孔间交叉污染）。

加酶标抗体：加入HRP标记抗体（100μL/孔），孵育后洗涤。

显色：加入底物A/B液（各50μL/孔），避光反应15分钟。

终止与测定：加入终止液（50μL/孔），立即于450nm读取OD值。

质量控制

校准曲线：以校准品OD值拟合标准曲线，计算样本浓度。

重复性：建议复孔检测，CV值应≤15%。

灵敏度：检测限为0.1 ng/mL。

注意事项

避免底物接触金属器械，显色剂临用前配制。

封板膜需密封严实，防止蒸发导致边缘效应（“花板”）。

洗板后需在无尘吸水纸上拍干，避免残留液体影响结果。

过期或变质的显色剂（如浅蓝色TMB）禁止使用。

保存与有效期

未开封试剂盒：2-8℃冷藏，有效期6个月。

开封后：酶标板需密封防潮，HRP标记抗体建议分装冻存。
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