预期用途

* 本试剂盒采用竞争性酶联免疫吸附（ELISA）原理。

* 用于体外定量测定人血清或血浆样本中的甲氨蝶呤（MTX）浓度。

* 适用于治疗药物监测(TDM)，确保化疗剂量在有效且安全的治疗窗内，避免毒性反应。

* 仅供体外诊断使用（For Research Use Only 或 For In Vitro Diagnostic Use - 需看试剂盒注册情况）。

检测原理

* 微孔板上预先包被针对MTX的特异性抗体。

* 样本（或标准品）中的MTX与加入的生物素标记的MTX（抗原）竞争结合包被抗体上的有限位点。

* 孵育后洗涤，去除未结合的成分。

* 加入酶标记链霉亲和素（Streptavidin-HRP）与生物素结合。

* 再次孵育后洗涤。

* 加入显色底物（如TMB），在HRP催化下产生颜色。

* 加入终止液终止反应。

* 使用酶标仪在450nm（TMB，主波长）及620-650nm（参考波长）读取吸光度(OD)。

* 关键点： 样本中MTX浓度越高，能竞争结合包被抗体的生物素标记MTX就越少，最终显色就越浅（OD值越低）。因此，OD值与样本中MTX浓度成反比。

试剂盒组分

| 组分 | 规格/状态 | 储存条件(开盖前) | 开盖后注意事项 |

| 微孔板 | 96孔，已包被抗体 | 2-8°C | 未用完板条放回铝箔袋密封干燥保存 |

| MTX标准品 | 冻干品或浓缩液，通常6-7个浓度点 (如 0, 0.05, 0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0 μM 或 μg/mL, ng/mL) | 2-8°C (冻干) 或 ≤ -20°C (浓缩液) | 复溶后或稀释后按要求储存，避免反复冻融 |

| 样品/标准品稀释液 | 缓冲液 | 2-8°C | 按说明储存 |

| 生物素标记的MTX (检测抗原) | 浓缩液 | 2-8°C | 按说明书稀释，稀释后按要求储存 |

| 酶结合物(HRP-Streptavidin) | 浓缩液 | 2-8°C | 按说明书稀释，稀释后按要求储存 |

| 洗涤缓冲液(浓缩液) | 10X 或 20X 浓缩液 | 2-8°C | 使用前用去离子水稀释成工作液 |

| 显色底物(TMB) | 无色或淡蓝色液体 | 2-8°C 避光 | 避光保存，若有颜色变化或沉淀勿用 |

| 终止液 | 酸性溶液 (通常是1M或2M H2SO4/H3PO4) | 室温或2-8°C | 小心操作，具腐蚀性 |

| 封板膜 | 不干胶薄膜 | 室温 | - |

| 板架 | (如有) | 室温 | - |

| 说明书 | | | |

样本采集与处理

* 样本类型： 血清、血浆（肝素锂、肝素钠、EDTA抗凝）。

* 重要： 遵循特定说明书中关于可接受抗凝剂的说明。避免使用含有叠氮钠的采血管或样本，因叠氮钠抑制HRP活性！

* 采集： 静脉采血，按标准流程分离血清/血浆（避免溶血）。建议采集峰浓度（给药后约24小时）和谷浓度（下次给药前）样本。

* 储存： 立即分析为佳。如不能立即检测，2-8°C可稳定短期（通常≤7天），需长期保存（数月）应≤ -20°C或更低（避免反复冻融）。样本检测前应充分解冻混匀。冻融次数应尽量少（<3次），需按说明书确认。

* 稀释： 如样本浓度预期超出检测范围上限，需用提供的样本稀释液进行稀释。稀释倍数需纳入最终计算。

质量控制

* 每次检测必须同时包括标准曲线。

* 强烈建议使用质控品(Commercial Quality Control Serum或Internal Controls)。质控品应在试剂盒检测范围内选定至少两个浓度水平（低、高），结果应在预期值±2SD范围内。如失控，需分析原因并考虑重测。

* 遵守实验室内部的质量控制程序。

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