产品概述

本试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA），用于定量检测人血清或血浆中己糖激酶（HK）的浓度。试剂盒基于固相夹心法原理，通过特异性抗体结合、酶催化显色反应及吸光度测定，实现高灵敏度和高特异性的检测。

实验原理

包被与结合：微孔板预包被HK捕获抗体，加入样本或标准品后，HK与抗体结合。

标记与显色：加入HRP标记的检测抗体形成复合物，洗涤后加入底物TMB。在过氧化物酶催化下，TMB显蓝色，酸性终止液转化为黄色。

定量分析：颜色深浅与HK浓度正相关，450nm波长下测定OD值，通过标准曲线计算浓度。

样本处理要求

血清样本

采集全血至血清分离管，室温静置2小时或4℃过夜。

1000×g离心20分钟，取上清；-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

2. 血浆样本

使用EDTA或肝素抗凝管采集，30分钟内2-8℃离心（1000×g，15分钟）。

取上清立即检测或-20℃/-80℃保存，避免反复冻融。

试剂盒组成

| 组分 | 96孔配置 | 48孔配置 | 保存条件 |

| 预包被微孔板 | 1块（96T） | 半块（48T） | 2-8℃ |

| HK标准品（400ng/ml）| 0.6ml | 0.3ml | 按说明书稀释 |

| 生物素标记抗体 | 6ml | 3ml | 即用型 |

| 亲和素-HRP | 10ml | 5ml | 即用型 |

| 底物A/B | 各6ml | 各3ml | 避光保存 |

操作步骤

加样：依次加入标准品、样本至微孔，每孔50μl。

孵育：37℃温育30分钟，洗涤3次。

加检测抗体：每孔加入HRP标记抗体50μl，重复孵育与洗涤。

显色：加入底物A/B各50μl，避光反应10分钟。

终止与检测：加入终止液，15分钟内测定450nm OD值。

注意事项

试剂使用前平衡至室温，避免交叉污染。

标准品需按梯度稀释，样本避免溶血或脂血干扰。

过期或变质的底物（颜色异常）不得使用。

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