检测原理

采用竞争性ELISA法。样本中的DA与固定在酶标板上的DA类似物竞争结合生物素标记的抗DA抗体。加入链霉亲和素-HRP后形成复合物，通过TMB显色反应测定吸光度（OD值）。颜色深度与样本中DA含量成反比。

试剂盒组成

| 组分 | 规格 | 保存条件 |

| 预包被DA抗原微孔板 | 96孔（12条）| 2-8℃干燥避光 |

| DA标准品（0-1000 pg/mL） | 6-8浓度梯度 | -20℃或-80℃ |

| 生物素标记抗DA抗体 | 1瓶 | -20℃ |

| HRP标记链霉亲和素 | 1瓶 | 2-8℃（避光） |

| TMB显色液 | 1瓶 | 2-8℃（避光） |

| 终止液（0.5M H₂SO₄） | 1瓶 | 室温 |

| 样本稀释液 | 1瓶 | 2-8℃ |

| 洗涤液（20X浓缩液） | 1瓶 | 2-8℃（稀释后室温） |

样本要求

适用样本类型：

血清、血浆（肝素/EDTA抗凝）

脑脊液、组织匀浆液、细胞培养上清

尿液（需酸化预处理）

前处理建议：

血浆/血清：离心去除沉淀，-80℃分装保存（避免反复冻融）

组织样本：用PBS匀浆后离心取上清（蛋白浓度建议≤1 mg/mL）

注：含高浓度脂质/溶血样本需过滤处理以防假阳性。

灵敏度与检测范围

检测范围：5 pg/mL - 800 pg/mL

最低检测限（LOD）：≤ 2 pg/mL

精密度：

批内变异系数（CV）< 8%

批间变异系数（CV）< 10%

操作流程

标准品/样本稀释：标准品梯度稀释，样本用稀释液1:2~1:5预稀释。

加样：50μL标准品/样本 + 50μL生物素标记抗体 → 37℃孵育45分钟。

洗涤：拍干孔内液体，用1X洗涤液洗板3次。

酶反应：每孔加100μL链霉亲和素-HRP → 37℃孵育30分钟。

显色：洗板后加TMB显色液90μL → 室温避光15分钟。

终止：加50μL终止液（颜色由蓝→黄）。

读数：450nm波长测OD值（参考波长570nm校正）。

数据处理

标准曲线：以标准品浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标拟合曲线（四参数方程）。

浓度计算：根据样本OD值反向插值得出浓度，再乘以稀释倍数。

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