预期用途

本试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆、细胞培养上清液或组织裂解液中NOD2蛋白的含量。适用于免疫学研究、炎症性疾病机制探索、药物筛选评估等领域。

检测原理

预包被板：96孔板预先包被人NOD2特异性捕获抗体。

样本孵育：样本中NOD2蛋白被孔内抗体捕获。

检测抗体结合：加入生物素标记抗人NOD2二抗，形成抗体-抗原-二抗复合物。

酶联反应：加入链霉亲和素-HRP（辣根过氧化物酶），特异性结合生物素。

显色反应：加入TMB底物，在HRP催化下产生蓝色产物，终止后变黄色。

定量：450nm波长测OD值，OD值与NOD2浓度成正比。

试剂盒组成

| 组分 | 规格（96T） | 保存条件 |

| 预包被微孔板 | 1块（可拆卸） | 2~8°C |

| NOD2标准品 | 6管（0, 0.156, 0.312, 0.625, 1.25, 2.5, 5 ng/mL） | -20°C |

| 生物素化检测抗体 | 1管（120μL） | -20°C |

| 链霉亲和素-HRP | 1管（120μL） | -20°C |

| TMB显色液 | 1瓶（10mL） | 避光 2~8°C |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 1瓶（10mL） | 2~30°C |

| 洗液（30X浓缩液） | 1瓶（20mL） | 2~8°C |

| 封板膜 | 3张 | 室温 |

注意：终止液含强酸，避免接触皮肤！

样本处理指南

| 样本类型 | 前处理步骤 |

| 血清/血浆 | EDTA抗凝，3000rpm离心10分钟去除杂质 |

| 细胞培养上清 | 直接使用或离心去除细胞碎片 |

| 组织裂解液 | 称重后加PBS匀浆，离心取上清 |

样本建议分装后-80°C保存，避免反复冻融⚠️

操作流程

准备试剂：所有组分提前平衡至室温（20-25°C）

稀释洗涤液：20mL 30X浓缩液 + 580mL蒸馏水 → 600mL工作液

标准品梯度稀释：用标准品稀释液逐级稀释

加样：

孔位规划：标准曲线孔 / 样本孔 / 空白孔（各设2复孔）

加入100μL样本或标准品

孵育：37°C温育90分钟

洗板：吸弃液体 → 加350μL洗液 → 静置1分钟 → 重复×3次

加检测抗体：每孔100μL → 37°C孵育60分钟

加酶结合物：每孔100μL → 37°C避光反应30分钟

显色：每孔90μL TMB → 避光反应15分钟（显蓝色）

终止：每孔50μL终止液（变黄色）

读值：在5分钟内测450nm波长吸光度（参考波长630nm）

结果计算

计算标准品孔OD值均值

以标准品浓度为X轴，OD450为Y轴，拟合标准曲线（4-PL拟合推荐）

根据样本OD值从曲线换算浓度（推荐使用ELISA数据计算软件如ELISACalc）

稀释样本需乘以稀释系数

技术性能验证

| 参数 | 结果 |

| 灵敏度 | 0.05 ng/mL

| 检测范围 | 0.156–5 ng/mL

| 批内变异系数 | <8%

| 批间变异系数 | <12%

| 回收率 | 85–115%

| 交叉反应 | 与人NOD1、NLRP3交叉反应<0.1%

注意事项

避免污染：不同试剂使用独立吸头

反应时间：每步骤需严格计时

温度平衡：试剂和微孔板必须提前平衡至室温

重复验证：临界值样本建议重复检测

生物安全：样本需按潜在感染物处理，佩戴防护装备

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