产品概述

检测方法：双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)

检测靶标：大鼠生长激素(Growth Hormone, GH)

样本类型：血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆液

检测范围：通常为15.6–1000 pg/mL

灵敏度：通常< 5 pg/mL

保存条件：2–8℃（未开封），有效期12个月

检测原理

采用双抗体夹心ELISA法：

预包被抗大鼠GH抗体于微孔板中；

加入样本/标准品，GH与包被抗体结合；

加入生物素标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-检测抗体”复合物；

加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素；

加入TMB底物显色，颜色深浅与GH浓度成正比；

终止液终止反应，450 nm波长下测OD值。

试剂盒组分（96T）

| 组分 | 规格 | 数量 |

| 预包被微孔板 | 96孔 | 1块 |

| 大鼠GH标准品 | 冻干粉/液体 | 1瓶（含梯度浓度） |

| 样本稀释液 | 20 mL | 1瓶 |

| 生物素标记检测抗体 | 120 μL | 1管 |

| HRP标记链霉亲和素 | 120 μL | 1管 |

| TMB显色底物 | 10 mL | 1瓶 |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 10 mL | 1瓶 |

| 洗涤缓冲液（20×浓缩液） | 30 mL | 1瓶 |

| 封板膜 | - | 4张 |

| 说明书 | - | 1份 |

注：使用前请将各液体组分恢复至室温，浓缩洗涤液需用蒸馏水稀释20倍。

样本处理

血清/血浆：采集后离心（3000 rpm, 10 min），分装上清液于-20℃保存，避免反复冻融。

细胞上清：离心去除沉淀，直接检测或-80℃保存。

组织匀浆：按重量加入PBS（如1:9），匀浆后离心取上清。

操作步骤

标准品稀释：用样本稀释液梯度稀释标准品（0, 15.6, 31.2, 62.5, 125, 250, 500, 1000 pg/mL）。

加样：

标准品孔：50 μL/孔

样本孔：50 μL/孔（建议做复孔）

空白孔：样本稀释液50 μL

孵育：37℃孵育90分钟，洗板5次。

加检测抗体：每孔加100 μL生物素化抗体，37℃孵育60分钟，洗板5次。

加酶结合物：每孔加100 μL HRP-链霉亲和素，37℃避光孵育30分钟，洗板5次。

显色：每孔加90 μL TMB底物，37℃避光显色15–20分钟（显蓝色）。

终止：每孔加50 μL终止液（变黄色）。

检测：450 nm波长读取OD值（630 nm作参比波长）。

结果计算

计算标准品和样本的平均OD值；

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线（推荐四参数拟合）；

根据样本OD值从标准曲线计算GH浓度。

示例标准曲线：

（实际曲线需根据实验数据绘制）

注意事项

试剂保存：未开封试剂盒2–8℃保存；开封后未使用的板条需密封干燥保存。

避免污染：不同组分使用专用吸头，避免交叉污染。

洗涤充分：每次洗涤需拍干微孔板，防止残留影响结果。

显色控制：显色时间过长可能导致背景升高，建议显色10分钟后密切观察。

样本要求：溶血、脂血或反复冻融样本可能影响结果准确性。

性能参数

精密度：批内CV < 10%，批间CV < 15%

回收率：85–115%

特异性：不与大鼠PRL、TSH、LH等发生交叉反应

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