检测原理

采用双抗体夹心ELISA法：

抗大鼠CLU抗体预包被于酶标板。

样本中的CLU与包被抗体结合。

加入生物素标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-抗体”复合物。

添加链霉亲和素-HRP，与生物素结合。

加入TMB显色底物，HRP催化显色。

终止液终止反应，在450nm波长测定吸光度（OD值），CLU浓度与OD值正相关。

适用范围

定量检测大鼠血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆等样本中的CLU蛋白浓度。

试剂盒组成

| 组分 | 规格 | 保存条件 |

| 预包被酶标板 | 96孔 | 2-8°C |

| CLU标准品 | 冻干粉×2 | -20°C |

| 标准品稀释液 | 10mL | 2-8°C |

| 生物素标记检测抗体 | 120μL | -20°C |

| 链霉亲和素-HRP | 120μL | -20°C |

| 样本稀释液 | 20mL | 2-8°C |

| TMB显色液 | 10mL | 避光，2-8°C |

| 终止液 | 10mL | 室温 |

| 洗涤液（20×浓缩） | 30mL | 2-8°C |

| 封板膜 | 4张 | 室温 |

样本前处理

血清/血浆：离心去除颗粒，避免反复冻融。

细胞上清：离心后直接检测。

组织匀浆：称重后加PBS匀浆，离心取上清。

稀释：用样本稀释液按建议比例稀释（详见说明书）。

操作步骤

试剂准备：标准品复溶、系列稀释；洗涤液按1:20稀释。

加样：每孔加标准品/样本100μL，37°C孵育90分钟。

洗板：弃液体，洗涤液洗3次。

加检测抗体：100μL/孔，37°C孵育60分钟。

洗板：重复步骤3。

加SA-HRP：100μL/孔，37°C孵育30分钟。

洗板：重复步骤3。

显色：加TMB 90μL/孔，避光孵育15分钟。

终止：加终止液50μL/孔。

读值：450nm波长测定OD值（5分钟内完成）。

结果计算

绘制标准曲线：以标准品浓度（ng/mL）为X轴，OD值为Y轴（log-log拟合）。

根据样本OD值计算CLU浓度。

示例标准曲线范围：1.56~100 ng/mL。

技术参数

| 项目 | 参数 |

| 检测范围 | 1.56 - 100 ng/mL |

| 最低检测限（LOD） | 0.39 ng/mL |

| 精密度（CV%） | 板内<8%，板间<10% |

| 特异性 | 不与大鼠其他蛋白交叉反应 |

| 保存期限 | 12个月 |

注意事项

所有组分回温至室温后使用。

避免洗涤液结晶影响洗板效果。

样本避免反复冻融（分装保存于-80°C）。

终止液含硫酸，避免接触皮肤。

不同批次试剂不可混用！

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