大鼠α葡萄糖苷酶(a-Glu)ELISA试剂盒

检测原理

本试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。预先包被大鼠α-Glu捕获抗体的微孔板中依次加入样本、标准品及HRP标记的检测抗体，经温育和洗涤后，加入底物TMB显色。TMB在过氧化物酶催化下转化为蓝色，酸化后呈黄色，其颜色深度与样本中α-Glu浓度呈正相关。通过酶标仪测定450 nm波长下的吸光度（OD值），依据标准曲线计算样本浓度。

样本处理与保存

血清：全血室温静置2小时或4℃过夜后，1000×g离心20分钟取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

血浆：EDTA或肝素抗凝采集，30分钟内2-8℃条件下1000×g离心15分钟，取上清检测或冻存（同上）。

细胞上清液：3000×g离心10分钟去除颗粒物后取上清。

组织匀浆：组织与生理盐水匀浆后，3000×g离心10分钟取上清。

注意事项

仅限科研使用，不可用于临床诊断。

标准品需按梯度稀释，避免污染。

实验前确保所有试剂平衡至室温，洗涤步骤需彻底。

样本避免反复冻融，分装保存以保持稳定性。

试剂盒组成

预包被微孔板

标准品

HRP标记检测抗体

TMB显色液、终止液

洗涤缓冲液（浓缩）

说明书及标准曲线模板

性能参数

灵敏度：<0.1 ng/mL

检测范围：0.156-10 ng/mL

批内/批间变异系数：≤10%
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 操作步骤

加样：依次加入标准品、样本至对应孔位。

温育：37℃孵育60分钟，洗涤3次。

加酶标抗体：每孔加入HRP标记抗体，重复温育及洗涤。

显色：加入TMB避光反应15分钟，终止后测定OD值。

结果计算

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制曲线，通过拟合方程计算样本浓度。