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土壤多酚氧化酶(S-PPO)活性检测试剂盒(微量法)
包装:100管/96样


产品介绍

注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

S-PPO主要来源于土壤微生物、植物根系分泌物及动植物残体分解释放,催化土壤中芳香族化合物氧化成醌,醌与土壤中蛋白质、氨基酸、糖类、矿物等物质反应生成有机质和色素,完成土壤芳香族化合物循环,用于土壤环境修复。

S-PPO能够催化邻苯三酚产生紫色没食子素,后者在430nm有特征光吸收。

产品内容:

试剂一:粉剂×1瓶,临用前加入12ml蒸馏水,用不完的试剂仍4℃保存;

试剂二:液体5ml×1瓶,4℃保存;

试剂三:乙醚,4℃保存(自备) ;标准液:液体10ml×1瓶,重铬酸钾溶液(5mmol/L),相当于0.2mg/ml紫色没食子素溶液。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、乙醚(不允许快递)、30~50目筛、0.5mol/L HCL溶液、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干,过30~50目筛。

二、测定步骤

1、可见分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至430nm,蒸馏水调零。

2、标准液稀释:用0.5mol/L HCL溶液将标准液稀释至0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0mg/ml。

3、标准曲线的建立:以0mg/ml的标准液调零,取0.2ml稀释好的标准液于比色皿或96孔板中在430nm处测定吸光值A,根据吸光度(x)和浓度(y,mg/ml)做出标准曲线。

4、样本测定表

试剂名称测定管
风干土样(g)0.02
试剂一(μL)120
振荡混匀,30℃恒温培养1h
试剂二(μL)50
试剂三(μL)430

振荡数次,室温静置30min,蒸馏水调零,取200μL上层液于430nm处测定吸光值A。

三、S-PPO活性计算:

根据标准曲线,将样品吸光值A带入公式中(x),计算出样品浓度 y(mg/ml)。

单位的定义:每天每g土样中产生1mg紫色没食子素定义为一个酶活力单位。

S-PPO(mg/d/g土样)=y×V提取相÷W÷T =516×y

T:反应时间,1h=1/24d;V提取相:提取相总体积,0.43ml;W:样品质量,0.02g。

注意事项:

乙醚易挥发,转移至酶标板时建议一次性不要测定太多样本。

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