位置:首页 > 产品中心
多聚半乳糖醛酸酶(PG)检测试剂盒(可见分光光度法)
包装:50管/24样


产品介绍

注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

多聚半乳糖醛酸酶(EC3.2.1.15)是一种细胞壁结合蛋白,可以催化果胶分子中α-(1,4)-聚半乳糖醛酸的裂解,参与果胶的降解,使细胞壁结构解体,导致果实软化,与果实成熟、叶和花的脱落、病原物防御,细胞伸展发育以及木质化有关,在植物抗病性和食品贮藏保鲜领域具有较高的研究价值。

多聚半乳糖醛酸酶水解果胶酸生成半乳糖醛酸,具有还原性醛基,与DNS试剂反应生成红棕色物质,在540nm有特征吸收峰,测定540nm处吸光值变化可计算得多聚半乳糖醛酸酶活性。

产品内容:

提取液:液体50ml×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体20ml×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体25ml×1瓶,4℃避光保存。

需自备的仪器和用品:

天平、低温离心机、可见分光光度计、1 ml玻璃比色皿、恒温水浴锅。

操作步骤:

一、酶液提取

1、组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。16000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1ml提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后16000g,4℃离心10min,取上清置于冰上待测。

3、培养液:直接检测。

二、测定操作表

试剂名称(μL)对照管测定管
样本
100
煮沸样本100
试剂一400400
40℃水浴30min

试剂二500500
沸水浴5min,冰浴或自来水冷却,蒸馏水调零,1ml玻璃比色皿测定540nm处吸光值A,△A=A测定管-A对照管。

三、酶活性计算公式

标准曲线:y = 0.1544x - 0.1537,R2 = 0.9996

1、按照蛋白浓度计算

酶活性定义:在40℃,pH6.0条件下,每毫克蛋白每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

PG活性(mg/h/mg prot)=(△A+0.1537)÷0.1544 ×V反总÷(V样×Cpr)÷T= 129.53×(△A+0.1537)÷Cpr

2、按照样本质量计算

酶活性定义:在40℃,pH6.0条件下,每克样本每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

PG活性(mg/h/g)=(△A+0.1537)÷0.1544×V反总÷(V样×W÷V样总)÷T= 129.53×(△A+0.1537)÷W

3、按液体体积计算

酶活性定义:在40℃,pH6.0条件下,每毫升培养液每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

PG活性(mg/h/ml)=(△A+0.1537)÷0.1544×V反总÷V样÷T= 129.53×(△A+0.1537)

4、按细胞数量计算

酶活性定义:在40℃,pH6.0条件下,每104个细胞每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

PG活性(mg/h/104cell)=(△A+0.1537)÷0.1544×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T=129.53×(△A+0.1537)÷细胞数量

V反总:反应总体积,1ml;V样:反应中样本体积,0.1ml;V样总:加入提取液体积,1ml;Cpr:样本蛋白浓度,mg/ml;W,样本质量,g;T:反应时间,0.5h。

注意事项:

1、测定之前请先做预实验,如果吸光值较高或较低,请用提取液做适当的稀释或者加大样本量,并在计算公式中乘以稀释倍数或者以实际加入的样本体积参与计算。

2、煮沸样本建议将样本在沸水中煮沸10分钟,以将酶彻底灭活。

广州伟伯科技有限公司
手机: 13533759269
联系人: 林生
相关产品:
| 首页 | 联系我们 | 会员服务 | 广告服务 | 友情链接 |
版权所有 CopyRight © 2008-2024 粤ICP备08119708号