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线粒体呼吸链复合物I检测试剂盒(NADH-辅酶Q还原酶)(比色法)
货号:A089-1-1
参考价格:2790
包装:20管/10样


产品名称
Electron transport chain Complex I assay kit
线粒体呼吸链复合物I试剂盒(NADH-辅酶Q还原酶)
产品介绍

检测原理:
       线粒体呼吸链复合物I,通常称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸辅酶Q还原酶(reduced nicotinamide adenine dinucleotide coenzyme Q reductase, NADH-CoQreductase),又称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(reduced nicotinamide adeninedinucleotide dehydrogenase;NADH dehydrogenase),是线粒体电子传递链中***结构
成分:含有30至40多个多肽结构。其特征性的酶活性是鱼藤酮敏感的NADH-辅酶Q还原酶(NADH:Q Reductase)。复合物I催化线粒体内电子由供体NADH传递到内膜上辅酶Q受体(泛醌;ubiquinone)的能量转移反应,为整个呼吸链反应系统的**步。基于辅酶Q底物,在鱼藤酮存在与否的情况下,通过NADH-辅酶Q还原酶的催化,转化成还原型泛醌(CoQH2),同时还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced nicotinamide adeninedinucleotide;NADH)转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adeninedinucleotide;NAD),在分光光度仪下产生吸收峰值的变化(340nm 波长),由此定量测定NADH-辅酶Q还原酶的特异活性。其反应系统是:

                                                                         NADH:Q Reductase
                                NADH + H+ + CoQ ---------------------------------> NAD- + CoQH2


试剂组成:(20 管/10 样))
       缓冲液(Reagent A) 20 毫升
       反应液(Reagent B) 2.5 毫升
       阴性液(Reagent C) 2 毫升
       底物液(Reagent D) 500 微升
       专性液(Reagent E) 200 微升
       产品说明书 1 份

保存方式
       -20°C冰箱保存,避免反复冻融;反应液(Reagent B)含有毒性物质,避免直接用手接触;反应液(Reagent B)和底物液(Reagent D),避免光照,有效保证6个月

用户自备
       比色皿:用于比色分析的容器
       双波长分光光度仪:用于比色分析
       培养箱:用于孵育反应物

实验步骤
       实验开始前,将-20°C冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化;缓冲液(Reagent A)室温预热;反应液(Reagent B)和底物液(Reagent D)注意避光。然后进行下列操作。
     (一)、背景对照测定
1、移取 780 微升缓冲液(Reagent A)到新的比色皿
2、加入 100 微升反应液(Reagent B)
3、加入 20 微升底物液(Reagent D)
4、放进 30°C培养箱里静置 3 分钟
5、加入 100 微升阴性液(Reagent C)
6、上下倾倒数次,混匀(限定在 3 秒之内)
7、即刻放进分光光度仪检测,此为背景空对照:
(340 波长读数-380 波长读数)0 分钟-(340 波长读数-380 波长读数)1 分钟或 3 分钟
    (二)、样品总活性测定
1、移取 780 微升缓冲液(Reagent A)到新的比色皿
2、加入 100 微升反应液(Reagent B)
3、加入 20 微升底物液(Reagent D)
4、放进 30°C培养箱里静置 3 分钟
5、加入 100 微升待测样品(注意:10微克总线粒体蛋白)
6、上下倾倒数次,混匀(限定在 3 秒之内)
7、即刻放进分光光度仪检测,此为样品总活性读数:
(340 波长读数-380 波长读数)0 分钟-(340 波长读数-380 波长读数)1 分钟或 3 分钟
    (三)、样品非特异活性测定
1、移取 760 微升缓冲液(Reagent A)到新的比色皿
2、加入 100 微升反应液(Reagent B)
3、加入 20 微升专性液(Reagent E)
4、加入 20 微升底物液(Reagent D)
5、放进 30°C培养箱里静置 3 分钟
6、加入 100 微升待测样品(注意:10微克总线粒体蛋白)
7、上下倾倒数次,混匀(限定在 3 秒之内)
8、即刻放进分光光度仪检测,此为样品非特异活性读数:
(340 波长读数-380 波长读数)0 分钟-(340 波长读数-380 波长读数)1 分钟或 3 分钟

样品活性计算:      
      (1)、样品活性(总活性或非特异活性)
                     
                    单位:μmol NADH/min/mgprot

       (2)、样品特异活性

                           样品总活性-样品非特异活性=样品特异活性

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