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谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH法)
货号:S0056


产品名称
Cellular Glutathione Peroxidase Assay Kit with NADPH
产品介绍

        谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH法)(Cellular Glutathione Peroxidase Assay Kit with NADPH)是一种简单易行的通过紫外比色来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase, GPx)活性的试剂盒。
        绝大部分细胞内的谷胱甘肽过氧化物酶都是含硒的,且硒为该酶的活性中心组成部分。细胞内也有很少量的不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶存在。本试剂盒检测的是最常见的含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。
 谷胱甘肽过氧化物酶可以清除活细胞内的过氧化物,在保护细胞免受自由基损伤过程中起着关键作用。细胞内的脂类容易和自由基发生反应,产生脂类过氧化物。谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)还原脂类过氧化物,从而消除自由基的毒害作用。谷胱甘肽过氧化物酶几乎在所有组织中都有分布。在一些病理状况下谷胱甘肽过氧化物酶的活力会发生明显上调或下调。
       谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)催化过氧化氢以及许多有机过氧化物,产生水或有机醇。但以过氧化氢为底物进行检测会受同样可以分解过氧化氢的过氧化氢酶(Catalase)的影响,因为过氧化氢酶的酶活性会干扰谷胱甘肽过氧化物酶的测定。本试剂盒利用了一种间接测定的方法。谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)可以催化GSH产生GSSG,而谷胱甘肽还原酶可以利用NADPH催化GSSG产生GSH,通过在A340检测NADPH的减少量就可以计算出谷胱甘肽过氧化物酶的活力水平。在上述反应中,谷胱甘肽过氧化物酶是整个反应体系的限速步骤,因此NADPH的减少量和谷胱甘肽过氧化物酶的活力线性相关。

检测原理:
       GPx为谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase),GR为谷胱甘肽还原酶(Glutathione reductase),R-OOH为过氧化物。


       谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)可以催化GSH产生GSSG,而谷胱甘肽还原酶可以利用NADPH催化GSSG产生GSH,通过在A340检测NADPH的减少量就可以计算出谷胱甘肽过氧化物酶的活力水平。在上述反应中,谷胱甘肽过氧化物酶是整个反应体系的限速步骤,因此NADPH的减少量和谷胱甘肽过氧化物酶的活力线性相关。

产品特点:
       本试剂盒的使用灵活方便,样品用量和检测时间的范围宽,样品用量可以根据样品中GPx的活力在0.1-50微升之间调整,检测时间可以根据样品中GPx的活力在5-30分钟内进行调整。
       本试剂盒提供的有机过氧化物试剂(t-Bu-OOH)在没有谷胱甘肽过氧化物酶存在的情况下不会和GSH产生反应,也不会被细胞内的过氧化氢酶催化而分解。因而可以较为特异地检测出谷胱甘肽过氧化物酶的活力。
由于t-Bu-OOH不能被不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶所催化,所以本试剂盒可以比较特异地定量检测最常见的含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。
       本试剂盒可检测组织匀浆产物、细胞裂解产物等样品中谷胱甘肽过氧化物酶的活性。一个试剂盒可进行100次检测。

包装清单:

产品编号 产品名称 包装
S0056-1 样品匀浆液 100ml
S0056-2 谷胱甘肽过氧化物酶检测缓冲液 50ml
S0056-3 谷胱甘肽还原酶 100μl
S0056-4 NADPH 11.5mg
S0056-5 还原型谷胱甘肽(GSH) 10mg
S0056-6 过氧化物试剂(t-Bu-OOH) 200μl
说明书 1份


保存条件:

   -20℃保存,一年有效。NADPH溶解后宜适当分装并-70℃保存,4℃可以保存一天,-20℃保存一周后NADPH会降解10%以上。GSH配制成溶液后,适当分装后-20℃保存。

注意事项:

       本试剂盒检测时涉及氧化还原反应,因此所有氧化剂或还原剂都会干扰本试剂盒的测定。如果在样品中的还原剂无法避免,例如DTT、巯基乙醇等,则这些还原剂的总浓度至少低于0.1mM。0.15mM的DTT可以抑制40%的酶活力。
常用的Triton X-100、Tween-20等去垢剂都含有较高水平的过氧化物,会影响本试剂盒的测定。如果必须使用这些去垢剂,**使用纯度较高并注明含较低过氧化物的去垢剂。
       加入过氧化物试剂溶液后的**次读数,例如0分钟时A340读值不宜低于1。如果读数低于1,说明样品中的GPx活力太高,或者样品中本身的GSSG含量太高,需要将样品适当稀释或者减少样品的用量,否则反应很快就进入平台期,无法获取正常的检测数据。样品可以立即测定,也可以-70℃冻存待以后测定。
       一定要严格控制反应时的温度为25℃,否则会引起较多误差。
       NADPH不太稳定,要严格按照后续说明操作,谨防失活。
       本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
       为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。



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