细胞简介

大鼠骨髓单个核细胞分离自骨髓；骨髓是机体的造血组织，位于身体的许多骨骼内。成年动物的骨髓分两种：红骨髓和黄骨髓。红骨髓能制造红细胞、血小板和各种白细胞。血小板有止血作用，白细胞能杀灭与抑制各种病原体，包括细菌、病毒等；某些淋巴细胞能制造抗体。因此，骨髓不但是造血器官，它还是重要的免疫器官。骨髓是存在于长骨（如肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨质间的网眼中，是一种海绵状的组织，能产生血细胞的骨髓略呈红色，称为红骨髓。出生时，红骨髓充满全身骨髓腔，随着年龄增大，脂肪细胞增多，相当部分红骨髓被黄骨髓取代，最后几乎只有扁平骨骨髓腔中有红骨髓。骨髓单个核细胞是骨髓中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞和单核细胞。注意这里是（mononuclear cell）单个核细胞，而不是（Monocyte）单核细胞。单个核细胞的体积、形态和比重与骨髓其他细胞不同，利用一定比例聚蔗糖和泛影酸钠形成的等渗溶液作密度梯度离心，使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，可将各种血细胞与单个核细胞分离。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠骨髓单个核细胞采用取骨髓、通过密度梯度离心法制备而来制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的大鼠骨髓单个核细胞经过检测，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 半贴壁半悬浮

细胞形态 圆形

传代特性 不增殖；不传代

消化液 0.25%胰蛋白酶

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

培养基与培养条件

专用培养基：含FBS、生长添加剂、青霉素、链霉素等（推荐使用配套专用培养基）

培养环境：气相为95%空气+5%CO₂，温度37℃

换液频率：每2-3天换液一次

细胞复苏步骤

将冻存管置于37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混匀

1000rpm离心3-4分钟，弃上清，加1-2mL培养基重悬细胞

将细胞悬液接种至培养瓶/皿中，加入适量培养基，培养过夜

次日换液并检查细胞密度

细胞传代（仅当细胞密度达80%-90%时进行）

弃上清，用无钙镁离子PBS润洗细胞1-2次

加入1mL 0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液，37℃培养箱消化1-2分钟

显微镜下观察细胞变圆脱落后，加少量培养基终止消化

1000rpm离心4分钟，弃上清，加1-2mL培养基重悬

按1:2比例接种至新培养容器中，加入新鲜培养基培养

细胞冻存

收集细胞，1000rpm离心4分钟，弃上清，PBS清洗一遍

加入无血清细胞冻存液，调整细胞密度至5×10⁶~1×10⁷/mL

每支冻存管分装1mL细胞悬液，做好标识

先置于-80℃冰箱24小时，再转入液氮罐长期储存
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