细胞简介

大鼠冠状动脉成纤维细胞分离自冠状动脉组织；冠状动脉是供给心脏血液的动脉，起于主动脉根部，分左右两支，行于心脏表面。采用Schlesinger等的分类原则，将冠状动脉的分布分为三型：右优势型、均衡型、左优势型。左右冠状动脉是升主动脉的**对分支。左冠状动脉为一短干，发自左主动脉窦，经肺动脉起始部和左心耳之间，沿冠状沟向左前方行后，立即分为前室间支和旋支。前室间支沿前室间沟下行，旋支绕过心尖切迹至心的膈面与右冠状动脉的后室间支相吻合。它是构成冠状动脉壁的主要细胞成分，细胞膜上分布着多种离子通道，如电压依赖性Na+通道、多种Ca2+通道和K+通道；它们参与了静息电位的维持与细胞膜电位的复极化、超极化，调节血管平滑肌的收缩及舒张功能，此外动脉粥样硬化的发展也涉及冠状动脉平滑肌细胞增殖、炎症及凋亡等。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的肺成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠冠状动脉成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的大鼠冠状动脉成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传2-3代左右；2代以内状态**

消化液 0.25%胰蛋白酶

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

培养条件

换液频率：每2-3天更换一次培养基。

传代比例：1:2至1:3（建议细胞融合度达80%-90%时传代）。

消化液：0.25%胰蛋白酶（含EDTA）。

传代周期：可传3-8代。

细胞分离与制备

分离方法：

中性蛋白酶-胶原酶联合消化法或胰蛋白酶-胶原酶混合消化法（EnkiLife）。

质量控制：

原代细胞来源于新鲜组织，采集过程符合伦理规范，并通过α-SMA免疫荧光验证表型。

培养与传代操作

传代步骤：

吸弃旧培养液，用PBS轻柔冲洗。

加入适量胰蛋白酶消化，显微镜下观察细胞回缩后终止消化。

离心重悬，按比例接种至新培养瓶。

注意事项：

培养基冻融后可能出现少量絮状物，不影响使用。

操作时避免污染，接触培养液后需立即冲洗。
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