细胞简介

大鼠胚胎肝母细胞分离自胚胎肝组织；肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官，并在身体里面起着去氧化、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用；肝脏也制造消化系统中之胆汁。肝脏是机体内脏里***器官，位于机体中的腹部位置，在右侧横隔膜之下，位于胆囊之前端且于右边肾脏的前方，胃的上方。肝脏是机体消化系统中***消化腺，为一红棕色的V字形器官。肝脏是尿素合成的主要器官，又是新陈代谢的重要器官。肝脏起源于腹侧前肠内胚层细胞（一种多潜能干细胞）。在 ED8.5 的小鼠和 ED9.5 的大鼠，前肠的原始上皮细胞接触心肌中胚层后快速增殖，形成肝原基。大约1d后，原始上皮细胞侵入原始横膈，继续分化为幼稚肝脏上皮细胞，这些细胞先表达 AFP 然后是ALb。幼稚肝脏上皮细胞很快成熟，并进一步分化为肝细胞或胆管上皮细胞，因为此期的肝脏上皮细胞其具有向这两种肝实质细胞双向分化的潜能，所以又称肝母细胞。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠胚胎肝母细胞采用胶原酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的大鼠胚胎肝母细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传2-3代左右

消化液 0.25%胰蛋白酶

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

操作流程

细胞接收处理：

稳定培养4小时后，根据细胞密度决定换液或传代。

若细胞悬浮或部分悬浮，需离心后重悬于含15%血清的培养基，继续培养2-3天观察贴壁情况。

传代操作（贴壁细胞示例）：

四步消化法（推荐用于难消化细胞）：

弃旧培养基，用新培养基轻柔洗涤1-2次去除死细胞。

加入少量培养基吹打，收集贴壁不牢的细胞。

加入0.3ml胰酶润洗后弃去，再加入1ml胰酶消化至细胞间隙明显。

立即终止消化，吹打后分瓶培养。

培养操作规范

细胞接收后需立即检查是否漏液，静置2-4小时稳定状态。复苏时需37℃水浴快速解冻，离心去除冻存液后重悬于新鲜培养基。传代建议在80-90%汇合度时进行，使用0.25%胰蛋白酶消化1-3分钟，以1:2至1:5比例分瓶。冻存需配制含10%DMSO的冻存液，采用程序降温后转入液氮保存。所有操作需严格无菌，建议在二级生物安全柜内完成。

质量检测与注意事项

细胞需确保不含有HIV-1、HBV、HCV等病原体及支原体污染。运输方式可选择干冰冻存（-80℃保存不超过1个月）或常温培养瓶运输。收到细胞后需3天内反馈异常情况，操作失误或非推荐培养体系导致的细胞问题不予重发。特别注意：该细胞仅限科研使用，禁止用于临床治疗。
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