细胞简介

大鼠骨外膜细胞分离自骨外膜组织；骨外膜是指成骨细胞与破骨细胞紧贴骨密质外面包着的那层膜；在骨外膜和骨内膜中含有一种能够生成骨的细胞，称为成骨细胞，这种细胞具有使骨骼生长的功能。在骨外膜中还有另外一种专门破坏骨细胞的细胞，称为破骨细胞。这两种细胞作用相反又相互依据。成骨细胞像建筑工人，不停地生成新的骨组织，破骨细胞则像维修工人，不停地清除老化、死亡、破碎的骨结构，并且还负责拆除“违章建筑”，就是除去不需要的多余的骨组织，从而使骨的整体结构更符合生物力学的需要。正常情况下，两种细胞之间处于动态的平衡之中，完成骨的生长发育的新陈代谢。骨折之后，成骨细胞首先启动，从而促使新骨痂的生成，即骨折的愈合。但是，股痂只是恢复了骨的连续性，往往不符合生物力学的需要，改建塑形的过程则必须有破骨细胞的参与才能完成。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠骨外膜细胞采用胶原酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的大鼠骨外膜细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态**

消化液 0.25%胰蛋白酶

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

培养关键参数

培养基 含FBS、生长添加剂、青霉素/链霉素的专用内皮细胞培养基

培养条件 气相：空气95% + CO₂ 5%，温度37℃

换液频率 每2-3天换液一次

传代特性 可传2-3代（不同来源显示2-3代或18代以上，可能因培养方法差异）

消化液 0.25%胰蛋白酶

包被条件 PLL（0.1mg/ml）或明胶（0.1%）

细胞的制备流程

组织取材：从活体动物或新鲜手术标本中获取目标组织，取材过程需严格无菌操作，尽量缩短组织暴露时间

组织处理：通过机械剪切、酶消化（常用胰蛋白酶、胶原酶）等方式将组织分散成单细胞悬液

细胞分离：利用过滤、离心等方法去除细胞碎片和杂质，获得纯化的单细胞群体

接种培养：将细胞接种到含特定培养基的培养容器中，置于37℃、5%CO₂的培养箱中培养

关键操作要点

细胞复苏

快速解冻：37℃水浴中摇晃冻存管至完全融化

离心洗涤：1000 RPM离心4分钟，弃上清后用培养基重悬

培养维护

贴壁细胞：汇合度达80%-90%时传代，使用胰酶消化（如0.25% Trypsin-EDTA）

悬浮细胞：定期换液，避免密度过高导致营养耗尽

冻存保护

冻存液配方：推荐10% DMSO + 90% 完全培养基，现用现配

程序降温：-80℃冰箱过夜后转入液氮长期保存
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