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细胞简介：

大鼠视乳头星形胶质细胞分离自视神经乳头；视乳头位于黄斑区鼻侧附近，境界清楚，呈白色、圆盘状，因此也称为视盘。视网膜上视觉纤维在此汇集，并于此穿出眼球向视中枢传递。视乳头中央有一小凹陷区，称为视杯或生理凹陷。视乳头是视神经纤维聚合组成视神经的起始端，它没有视细胞，因而没有视觉，在视野中是生理盲点。视乳头是开角型青光眼最早受损的部位，星形胶质细胞是视神经乳头处主要的胶质细胞类型，可为视网膜神经节细胞无髓鞘的轴突提供结构和生物支持。青光眼视神经病变是全球首位不可逆性致肓眼病。青光眼视神经病变以视网膜神经节细胞轴突丧失并伴有视乳头处细胞外基质重坦为主要特征。导致视网膜神经节细胞丧失的病理生理机制尚未完全阐明，神经胶质细胞对调控神经元微环境起多重作用，越来越多的证据表明胶质细胞町能对神经系统发育、损伤、修复及再生起极为关键的作用。视乳头星形胶质细胞胞体多扁平，体积较大，形状多呈不规则的多边形，突起较粗，胞核为椭圆形，核仁清晰可见，核周有较密集物质，胞质稀疏，骨架结构良好，明显不同于长梭形的成纤维细胞形态。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠视乳头星形胶质细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法、结合差速贴壁制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的大鼠视乳头星形胶质细胞经GFAP免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形、多角形

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%胰蛋白酶

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
材料与试剂准备

实验器材：无菌培养皿、移液管、离心管、CO₂培养箱、超净工作台、倒置显微镜、离心机等，所有器材需提前灭菌处理。

基础试剂：

细胞培养基：根据细胞类型选择专用培养基，如DMEM、RPMI-1640、MEM等，部分细胞需添加血清（胎牛血清FBS、新生牛血清NBS）或无血清替代物。

消化液：常用0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，用于组织解离；对于某些敏感细胞，可选用胶原酶、透明质酸酶等。

缓冲液：PBS（磷酸盐缓冲液）、Hanks平衡盐溶液（HBSS），用于冲洗组织和细胞。

其他：抗生素（青霉素、链霉素）、抗真菌剂（两性霉素B）、细胞冻存液（含10% DMSO和90%血清）。

原代细胞分离与培养流程

1. 组织样本处理

取材：从新鲜动物或人体组织中获取样本，操作需在无菌环境下进行，尽量缩短样本暴露时间。

清洗：用含抗生素的PBS反复冲洗组织，去除血液、脂肪等杂质。

剪碎：将组织剪成1-2mm³的小块，便于后续消化。

2. 细胞解离

酶消化法：将组织块加入消化液，37℃水浴孵育，期间轻轻摇晃，根据组织类型调整消化时间（通常15-60分钟）。

机械法：对一些难以酶解的组织，可采用研磨、过筛等方式分离细胞，但需注意避免过度机械损伤。

终止消化：加入含血清的培养基，中和消化酶活性，随后用滤网过滤细胞悬液，去除未消化的组织碎片。

3. 细胞接种与培养

离心收集：将过滤后的细胞悬液离心（1000-1500rpm，5-10分钟），弃上清，用培养基重悬细胞。

细胞计数：使用血细胞计数板或细胞计数仪测定细胞浓度，调整至合适的接种密度（通常1×10⁵-1×10⁶ cells/mL）。

培养条件：将细胞接种于培养瓶/皿中，置于37℃、5% CO₂、湿度95%的培养箱中培养，根据细胞类型定期更换培养基。

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