细胞简介

人Ⅱ型肺泡上皮细胞分离自肺组织；肺泡由单层上皮细胞构成的半球状囊泡。肺中的支气管经多次反复分枝成无数细支气管，它们的末端膨大成囊，囊的四周有很多突出的小囊泡，即为肺泡。小肺泡细胞，又称I型肺泡细胞，厚约0.1微米，基底部是基底膜，无增殖能力。大肺泡细胞，又称Ⅱ型肺泡细胞，分泌表面活性物质（二棕榈酰卵磷脂），以降低肺泡表面张力。Ⅱ型肺泡细胞位于Ⅰ型肺泡细胞之间，数量较Ⅰ型肺泡细胞多，但覆盖面积比Ⅰ型肺泡细胞小。细胞立方形或圆形,顶端突入肺泡腔。细胞核圆形，胞质着色浅、呈泡沫状。电镜下，细胞游离而有少量微绒毛，胞质内富含线粒体和溶酶体，有较发达的粗面内质网和高尔基复合体。核上方有较多的分泌颗粒，电子密度高、大小不等，直径约0.1-1.0μm颗粒内含有平行排列的板层状结构，称为嗜饿性板层小体。小体内的主要成分为磷脂，以二棕榈酰卵磷脂为主，此外还有糖胺多糖及蛋白质等。颗粒内物质释放出来后，在肺泡表面形成一层粘液层，称为表面活性物质（surfactant）。表面活性物质有降低肺泡表面张力、稳定肺泡大小的作用。呼气时肺泡缩小，表面活性物质密度增加，表面张力降低，防止肺泡过度塌陷；吸气时肺泡扩张，表面活性物质密度减小，肺泡回缩力加大，可防止肺泡过度膨胀。表面活性物质的缺乏或变性均可引起肺不张，过度通气可造成表面活性物质缺乏；吸入毒气可直接破坏表面活性物质。Ⅱ型肺泡细胞有分裂、增殖并分化为Ⅰ型肺泡细胞的潜能，故具有修复受损伤上皮的作用。

方法简介：

公司实验室分离的人Ⅱ型肺泡上皮细胞采用弹性蛋白酶消化法制备而来制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的人Ⅱ型肺泡上皮细胞经SP-C免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代左右

消化液 0.25%胰蛋白酶

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

培养条件

换液频率：每2-3天更换一次培养基。

传代比例：1:2至1:3（建议细胞融合度达80%-90%时传代）。

消化液：0.25%胰蛋白酶（含EDTA）。

传代周期：可传3-8代。

细胞分离与制备

分离方法：

中性蛋白酶-胶原酶联合消化法或胰蛋白酶-胶原酶混合消化法（EnkiLife）。

质量控制：

原代细胞来源于新鲜组织，采集过程符合伦理规范，并通过α-SMA免疫荧光验证表型。

培养与传代操作

传代步骤：

吸弃旧培养液，用PBS轻柔冲洗。

加入适量胰蛋白酶消化，显微镜下观察细胞回缩后终止消化。

离心重悬，按比例接种至新培养瓶。

注意事项：

培养基冻融后可能出现少量絮状物，不影响使用。

操作时避免污染，接触培养液后需立即冲洗。
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