细胞简介

小鼠肾成纤维细胞分离自肾组织；肾脏是机体的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除体内代谢产物及某些废物、毒物，同时经重吸收功能保留水份及其他有用物质，如葡萄糖、蛋白质、氨基酸、钠离子、钾离子、碳酸氢钠等，以调节水、电解质平衡及维护酸碱平衡。肾脏同时还有内分泌功能，生成肾素、促红细胞生成素、活性维生素D3、前列腺素、激肽等，又为机体部分内分泌激素的降解场所和肾外激素的靶器官。肾脏的这些功能，保证了机体内环境的稳定，使新陈代谢得以正常进行。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损以及骨创伤的修复有着十分重要的作用。肾成纤维细胞是肾脏结缔组织中最重要的细胞类型，在体外培养中，一般大致成梭形、多角形或不规则形等，为贴壁生长型细胞。刚分离的肾成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。其主要功能有：①组成过滤屏障内壁的重要部分；②在炎症和致血栓物质的刺激合成必要的生物活性分子；③受损后影响系膜细胞和上皮细胞，进而影响肾脏病变。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠肾成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的小鼠肾成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%胰蛋白酶

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

材料与试剂准备

实验器材：无菌培养皿、移液管、离心管、CO₂培养箱、超净工作台、倒置显微镜、离心机等，所有器材需提前灭菌处理。

基础试剂：

细胞培养基：根据细胞类型选择专用培养基，如DMEM、RPMI-1640、MEM等，部分细胞需添加血清（胎牛血清FBS、新生牛血清NBS）或无血清替代物。

消化液：常用0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，用于组织解离；对于某些敏感细胞，可选用胶原酶、透明质酸酶等。

缓冲液：PBS（磷酸盐缓冲液）、Hanks平衡盐溶液（HBSS），用于冲洗组织和细胞。

其他：抗生素（青霉素、链霉素）、抗真菌剂（两性霉素B）、细胞冻存液（含10% DMSO和90%血清）。

原代细胞分离与培养流程

1. 组织样本处理

取材：从新鲜动物或人体组织中获取样本，操作需在无菌环境下进行，尽量缩短样本暴露时间。

清洗：用含抗生素的PBS反复冲洗组织，去除血液、脂肪等杂质。

剪碎：将组织剪成1-2mm³的小块，便于后续消化。

2. 细胞解离

酶消化法：将组织块加入消化液，37℃水浴孵育，期间轻轻摇晃，根据组织类型调整消化时间（通常15-60分钟）。

机械法：对一些难以酶解的组织，可采用研磨、过筛等方式分离细胞，但需注意避免过度机械损伤。

终止消化：加入含血清的培养基，中和消化酶活性，随后用滤网过滤细胞悬液，去除未消化的组织碎片。

3. 细胞接种与培养

离心收集：将过滤后的细胞悬液离心（1000-1500rpm，5-10分钟），弃上清，用培养基重悬细胞。

细胞计数：使用血细胞计数板或细胞计数仪测定细胞浓度，调整至合适的接种密度（通常1×10⁵-1×10⁶ cells/mL）。

培养条件：将细胞接种于培养瓶/皿中，置于37℃、5% CO₂、湿度95%的培养箱中培养，根据细胞类型定期更换培养基。
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