人穿孔素/成孔蛋白(PF/PFP)ELISA试剂盒

产品用途

用于定量检测人血清、血浆或细胞培养上清等样本中的穿孔素/成孔蛋白（PF/PFP）浓度，适用于免疫学研究和临床辅助诊断。

实验原理

采用双抗体夹心法：

微孔板预包被抗人PF/PFP单克隆抗体；

加入待测样本及标准品，PF/PFP与固相抗体结合；

加入HRP标记的检测抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物；

洗涤后加入TMB底物显色，颜色深度与PF/PFP浓度正相关；

酶标仪测定450nm吸光度（OD值），通过标准曲线计算浓度。

试剂盒组成

预包被微孔板

PF/PFP标准品（冻干粉或液体）

样本稀释液

HRP标记检测抗体

TMB显色液

终止液

浓缩洗涤液（20×）

封板膜

自备器材

酶标仪（450nm滤光片）

移液器及配套吸头（0.5-1000μl范围）

37℃恒温箱、蒸馏水

离心机（用于样本预处理）

操作步骤

样本准备：血浆/血清需离心去除颗粒，细胞上清需过滤澄清；

标准品复溶：按说明书加入稀释液，静置10分钟混匀；

加样孵育：每孔加入标准品或样本100μl，37℃孵育1小时；

洗涤：弃液后每孔加洗涤液300μl，重复5次；

加检测抗体：每孔加入HRP标记抗体，37℃孵育30分钟；

显色：洗涤后加TMB底物，避光反应15分钟；

终止：加入终止液，30分钟内测定OD值。

注意事项

试剂使用前需平衡至室温（20-25℃）；

浓缩洗涤液需按比例稀释，若有结晶可37℃水浴溶解；

避免反复冻融标准品或样本；

不同批次试剂不可混用。

计算与结果

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线，样本浓度通过曲线方程计算。

储存条件

未开封试剂盒2-8℃保存，有效期12个月；开封后微孔板需密封防潮。
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