检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（Sandwich ELISA）。将抗人IL-6单克隆抗体预包被于酶标板上，加入样本或标准品后，其中的IL-6会与包被抗体结合，再加入生物素标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-抗体”复合物。最后通过链霉亲和素-HRP（Streptavidin-HRP）催化底物显色，根据吸光度（OD值）定量IL-6浓度。

试剂盒组分（96T）

| 组分 | 规格 | 保存条件 |

| 预包被抗人IL-6酶标板 | 96孔板（可拆卸） | 2–8°C |

| 人IL-6标准品（冻干粉） | 10 ng/mL × 1支 | -20°C |

| 标准品稀释液 | 5 mL × 1瓶 | 2–8°C |

| 生物素标记抗人IL-6抗体 | 1.2 mL × 1瓶 | -20°C |

| 链霉亲和素-HRP（SA-HRP） | 1.2 mL × 1瓶 | -20°C |

| 洗涤缓冲液（20×浓缩） | 25 mL × 1瓶 | 2–8°C |

| TMB显色底物 | 10 mL × 1瓶 | 避光，2–8°C |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 10 mL × 1瓶 | 室温 |

| 封板膜 | 4张 | 室温 |

样本要求

血清/血浆：采集后离心去除颗粒物，-20°C保存（避免反复冻融）。

细胞上清：离心去除细胞碎片，直接检测或-80°C保存。

稀释建议：样本检测前建议用稀释液预实验，推荐起始稀释倍数≥5倍。

标准曲线范围

0.5–100 pg/mL（标准品梯度：0、0.5、5、20、50、100 pg/mL）

灵敏度

最低检测限（Limit of Detection, LOD）：0.1 pg/mL

操作步骤

标准品配制：冻干标准品用1mL稀释液复溶至10 ng/mL，随后按梯度稀释。

加样：每孔加入100μL标准品/样本，37°C孵育2小时。

加检测抗体：洗板后加入100μL生物素化抗体，37°C孵育1小时。

加SA-HRP：洗板后加入100μL SA-HRP，37°C孵育30分钟。

显色：洗板后加入100μL TMB，避光孵育15分钟（显蓝色）。

终止：加入50μL终止液（变黄色）。

检测：用酶标仪在450nm波长读取OD值（参考波长630nm）。

结果计算

计算标准品和样本的平均OD值。

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线（四参数logistics拟合）。

根据样本OD值从曲线计算IL-6浓度。

典型性能参数

回收率：85–115%

批内精密度：CV < 8%

批间精密度：CV < 12%

适用样本类型

血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆液（需额外离心处理）。

注意事项

试剂保存：生物素化抗体、SA-HRP需分装冻存，避免反复冻融。

洗涤充分：每步洗涤需用1×洗涤缓冲液洗板3次（300μL/孔）。

样本处理：避免使用溶血、脂血或浑浊样本。

酶标仪校准：显色后30分钟内完成检测。

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