试剂盒组成

预包被微孔板：抗大鼠PEDF单克隆抗体包被的96孔板（48孔配置可选）。

标准品：重组大鼠PEDF冻干粉，需按说明书溶解后梯度稀释。

检测抗体：生物素标记的抗大鼠PEDF多克隆抗体。

酶结合物：链霉亲和素标记的辣根过氧化物酶（SA-HRP）。

显色底物：TMB溶液（避光保存）。

终止液：2M硫酸溶液。

洗涤缓冲液：20×浓缩液，使用前需稀释。

检测原理

采用双抗体夹心ELISA法：

捕获：样本中的PEDF与预包被抗体结合。

标记：加入生物素化检测抗体形成复合物。

信号放大：SA-HRP与生物素结合，催化TMB显色。

定量：450nm波长测定吸光度，标准曲线计算浓度。

检测目标：定量检测大鼠血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中的PEDF含量。

样本要求

血清/血浆：建议EDTA或肝素抗凝，避免溶血，离心后分装保存于-20℃。

组织/细胞上清：匀浆后离心取上清，去除颗粒物。

操作步骤

平衡：试剂盒室温平衡30分钟。

加样：标准品及样本各100μL/孔，复孔建议。

孵育：37℃孵育90分钟，洗板5次。

检测抗体：加入生物素化抗体，37℃孵育60分钟，洗板。

酶结合物：加入SA-HRP，37℃避光反应30分钟，洗板。

显色：加入TMB，室温避光15分钟。

终止：加入终止液，5分钟内测定OD值。

注意事项

储存：未开封试剂盒4℃保存6个月，标准品及酶结合物开封后需-20℃分装保存。

洗涤：浓缩洗涤液若有结晶，37℃水浴溶解后使用。

交叉污染：避免不同批号试剂混用，封板膜不可重复使用。

质量控制：建议每板设置空白孔、标准曲线及质控样本。

技术参数

检测范围：15.6–1000 pg/mL（具体以标准曲线为准）。

灵敏度：<5 pg/mL。

特异性：与大鼠其他因子无交叉反应。

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