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伯氏立克次氏体(柯克斯体)PCR试剂盒
包装:50次


产品名称
Coxiella burnetii PCR Kit
产品介绍

产品及特点

立克次氏体为革兰氏阴性菌,是一类专性寄生于真核细胞内的 G-原核生物。是介于细菌与病毒之间,而接近于细菌的一类原核生物。一般呈球状或杆状,是专性细胞内寄生物,主要寄生于节肢动物,有的会通过蚤、虱、蜱、螨传入人体、如斑疹伤寒、战壕热。本产品就是根据 PCR原理开发的检测伯氏立克次体产品,它具有下列特点:

1、即开即用,用户只需要提供 DNA模板。

2、引物经过精心优化,专一性强,只扩增伯氏立克次氏体(柯克斯体),但跟其他微生物无交叉反应。

3、提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4、PCR  mix中含上样染料,PCR后可以直接上样电泳。

5、本试剂盒足够做 40μL体系的 PCR  50次。

6、本产品只能用于科研。

规格及成分

成份编号十孔盒包装
PCR  MagicMix  3.0908051  mL(红盖)
超纯水1009351  mL(亮黄盖)
伯氏立克次氏体(柯克斯体)PCR引物混合液13-53300yw100  μL(白盖)
伯氏立克次氏体(柯克斯体)PCR阳性对照(1×108拷贝/μL)60908-53300pc50  μL(黄盖)
核酸释放剂(试用装)6120220次(1mL、绿盖)
使用手册13-53300sc1份

运输及保存

低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其他试剂。

自备试剂

样品 DNA。

使用方法

一、样品 DNA的制备

1、如果有 N个样品,必须设置 N+2个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为 PC。另外用水作为 NC。

2、用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸纯化试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20次免 DNA提取的核酸释放剂,本产品的裂解液可以直接作为 PCR模板,省略了 DNA提取步骤。

二、设置 PCR反应(40 μL体系)

3、对 N+2个样品,在 PCR时需要增加一个 PCR阳性对照和一个 PCR阴性对照,故需要设置 N+4个反应。在 N+4个 PCR管中分别加入下列成分:

成分N+2个样品管PCR阴性对照管PCR阳性对照管
PCR  MagicMix  3.0各 20 μL20 μL20 μL
伯氏立克次氏体(柯克斯体)PCR引物混合液各 2 μL2 μL2 μL
N+2个样品 DNA模板各 18 μL--
PCR阴性对照(超纯水)-18 μL-
PCR阳性对照 (伯氏立克次氏体PCR阳性对照的 10000倍稀释液)--18 μL

4、按下表设置 PCR反应:

过程温度时间
预变性95℃5 min
PCR反应(35个循环)95℃30 sec
PCR反应(35个循环)54℃30 sec
PCR反应(35个循环)72℃30 sec
最后延伸72℃10 min

三、电泳检测

5、取 10-20  μL PCR产物。电泳检测 PCR产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR产物阳性对照必须有 366bp条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10倍后重复 PCR扩增以排除 PCR抑制剂的感染。

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