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牛副流感病毒3型RT-PCR试剂盒
包装:50次


产品名称
Bovine Parainfluenza Virus 3 RT-PCR Kit
BPIV-3 RT-PCR Kit
产品介绍

产品及特点

牛副流感病毒 3型(BPIV3)是引起牛呼吸系统疾病的主要病原,广泛分布于世界养牛业发达地区,BPIV3常与其他病毒或细菌混和感染或继发感染,对养牛业造成巨大的经济损失。本产品根据 PCR原理开发,可用于科研领域快速检测牛副流感病毒 3型。它具有下列特点:

1、一站式,用户不需要单独准备每种成分,包括引物和对照。

2、根据牛副流感病毒 3型的保守基因序列设计的引物,具有良好的特异性。

3、灵敏度可以达到 1000拷贝/反应。

4、使用一管式 RT-PCR技术,RT和 PCR两步在一个试管内完成,不需要中间转移样品,降低了操作误差和可能的污染。

5、本产品足够 50次 20μL体系的 RT-PCR。

6、本产品只能用于科研,不能用于临床。

规格及成分

成份编号十孔盒包装
5×双酶一管式 RT-PCRBuffer91202a200 μL(橘黄盖)
MMLV-Taq  Mix91202b75 μL(红盖)
超纯水1009351 mL(亮黄盖)
牛副流感病毒 3型 RT-PCR引物混合液13-23600yw100 μL(白盖)
牛副流感病毒 3型 RT-PCR阳性对照(1×108拷贝/μL)60908-23600pc50 μL(黄盖)
核酸释放剂(试用装)61202a20次(1mL,绿盖)
使用手册13-23600sc1份

注:为避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供专一的 DNA片段作为阳性对照。

运输及保存

低温运输,-20℃保存,保存期限为 12个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置,因为其容易污染其他成分,造成假阳性。

自备试剂

样品 RNA

使用方法

一、样品 RNA的制备1、如果有 N个样品,必须设置 N+2个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL牛副流感病毒 3型 PCR阳性对照的 10000倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。

2、用自选方法纯化 N+2个样品的 RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20次核酸释放剂试用装。

二、设置 RT-PCR反应(20μL体系)

3、如果有 N+2个样品 ,则标记 N+4个 PCR管 (额外增加的两个管一个是 RT-PCR阳性对照,另一个是 RT-PCR阴性对照)并按照下表在 PCR管中加入下列成分:

成份

N+2个样品管RT-PCR阴性对照RT-PCR阳性对照
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer各 4 μL4 μL4 μL
牛副流感病毒 3型 RT-PCR引物混合液各 2 μL2 μL2 μL
N+2个制备的 RNA样品各 12.5 μL--
超纯水-12.5 μL-
牛副流感病毒 3型 RT-PCR阳性对照的 10000倍稀释液--12.5 μL
MMLV-Taq  Mix1.5  μL1.5  μL1.5  μL

4、上机进行 RT-PCR,RT-PCR反应参数为:

过程温度时间
逆转录42℃30 min
预变性95℃5 min
PCR反应(35个循环)95℃30 sec
PCR反应(35个循环)53℃30 sec
PCR反应(35个循环)72℃20 sec
延伸72℃7 min

5、琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物,则说明实验失败,需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、阳性对照有预期扩增产物的情况下,才有必要分析样品的实验结果,如果有预期片段大小的扩增产物则为阳性,如果无则为阴性。

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