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蔗糖含量测试盒(微量法)
货号:ZHT-1-Y
包装:100管/96样


产品介绍

正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

蔗糖是植物光合作用的主要产物,也是糖分运输和储藏的主要形式。因此,测定蔗糖含量对于植物糖代谢具有重要意义。此外,蔗糖含量是饮料﹑蜂蜜、果脯﹑糖果和乳制品等产品质量控制的重要指标之一。

测定原理:

先用碱与样品共热,破坏其中的还原糖。然后在酸性条件下将蔗糖水解生成葡萄糖和果糖,果糖进一步与间苯二酚反应,生成有色物质,在 480nm下有特征吸收峰。

所需的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:液体 100ml×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体 10ml×1瓶,4℃保存;

试剂二:液体 2ml×1瓶,4℃保存;

试剂三:液体 20ml×1瓶,4℃保存;

试剂四:液体 6ml×1瓶,4℃保存;

试剂五:粉剂 0.5g×1瓶,常温保存。

蔗糖提取:

称取 0.1~0.2g样本,常温研碎,加入 0.5ml提取液,适当研磨后快速转移到离心管中,置于 80℃水浴锅中 10min,振荡 3~5次,冷却后,4000g,常温离心 10min,取上清,加入 2mg试剂五,80℃脱色 30min,再加入 0.5ml提取液,冷却后,4000g,常温离心 10min,取上清液测定。

测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热 30min以上,调节波长至 480nm,蒸馏水调零。

2、样本测定,(在 EP管中依次加入下列试剂):

试剂(μL)空白管标准管测定管
样本

25
试剂一
25
蒸馏水25

试剂二151515

混匀,沸水浴煮沸 5min左右(盖紧,防止水分散失)

试剂三175175175
试剂四505050

混匀,沸水浴 30min,冷却后取 200μL至微量石英比色皿或 96孔板中测定 480nm处光吸收值,空白管、标准管和测定管分别记为 A1、A2和 A3。空白管和标准管只要做一管。

蔗糖含量计算:

1、按照蛋白质含量计算

蔗糖含量(mg/mg  prot)=(C标准管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(V1×Cpr)=(A3-A1)÷(A2-A1)÷Cpr

此法需要自行测定蛋白浓度。

2、按照样品质量计算

蔗糖含量(mg/g鲜重)=(C标准管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=(A3-A1)÷(A2-A1)÷W。

C标准管:标准管浓度,1mg/ml;V1:加入样本体积,0.025ml;V2:加入提取液体积,1ml;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本鲜重,g。

注意:最低检测限为 100ng/g 鲜重或 1ng/mg prot

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